【摘 要】
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随着人民生活水平的提高,牛肉消费量在快速增长,与此同时消费者对牛肉品质的要求也越来越高,而肌肉生长与发育对牛肉品质的好坏有直接影响,因此研究肌肉发育有助于解决我国黄牛品种生长速度慢,产肉性能低等缺点。miRNAs是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子,在肌肉发育中起关键作用,目前的研究多以MyomiRs为研究对象,如miR1/206家族等。然而仍有许多其他miRNAs在生
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31272408）； 国家自然科学基金项目（31772574）；
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随着人民生活水平的提高,牛肉消费量在快速增长,与此同时消费者对牛肉品质的要求也越来越高,而肌肉生长与发育对牛肉品质的好坏有直接影响,因此研究肌肉发育有助于解决我国黄牛品种生长速度慢,产肉性能低等缺点。miRNAs是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子,在肌肉发育中起关键作用,目前的研究多以MyomiRs为研究对象,如miR1/206家族等。然而仍有许多其他miRNAs在生物体内发挥着重要的作用,本文以牛肌原代细胞为研究对象,研究miR-148a-3p对成肌细胞增殖、凋亡的影响,为秦川牛分子选育提供分子依据并积累基础资料。主要研究结果如下:1.物种间同源性比对发现miR-148a-3p物种间保守性很高,尤其在人和小鼠上。2.组织表达谱分析表明miR-148a-3p在肌肉中有较高的表达水平,由此推测其在肌肉发育中发挥着某种作用。3.成功构建了miR-148a-3p和KLF6 CDS区的pc DNA3.1（+）过表达载体,成功构建了KLF6基因3’UTR区的荧光素酶报告载体及其突变型载体。4.利用CCK8、Ed U、流式细胞术和q PCR、western blot等方法检测miR-148a-3p对成肌细胞增殖和凋亡的作用,结果显示过表达miR-148a-3p能够抑制增殖关键基因PCNA,Cyclin D1,CDK2的表达,降低成肌细胞增殖系数;抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达,促进p53和Bax基因的表达。5.双荧光素酶报告系统表明miR-148a-3p和KLF6的靶向关系,q PCR和western blot结果也表明miR-148a-3p抑制KLF6基因的表达,挽救实验进一步证明二者的相互关系。6.RNAi实验中,PCNA,Cyclin D1,CDK2,Bcl-2 m RNA水平下调,p53和Bax基因m RNA水平上调,证明KLF6基因促进成肌细胞增殖,抑制成肌细胞凋亡。综上所述,miR-148a-3p通过靶向结合KLF6基因的3’UTR区从而抑制牛成肌细胞增殖,促进牛成肌细胞凋亡。
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