【摘 要】
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乙烯作为一种气态的植物激素,在水稻生长发育以及响应生物或非生物胁迫过程中发挥着重要作用。TPR(Tetratricopeptide Repeat)类蛋白是一种含有单个或多个TPR基序的辅伴侣分
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乙烯作为一种气态的植物激素,在水稻生长发育以及响应生物或非生物胁迫过程中发挥着重要作用。TPR(Tetratricopeptide Repeat)类蛋白是一种含有单个或多个TPR基序的辅伴侣分子,调控着多种植物激素信号转导通路。本实验室曾以水稻TPR类蛋白OsTPR1为诱饵,通过酵母双杂交实验筛选到一个乙烯受体蛋白OsERS1(Ethylene Responsesensor1),同时,Real-time PCR实验结果表明,14日龄野生型日本晴水稻幼苗经乙烯与黑暗联合处理后OsTPR1和OsERS1的mRNA水平均呈上升趋势,暗示两者可能共同参与了乙烯信号调控。本文在此基础上,进一步验证了OsTPR1与OsERS1之间的相互作用特性。GFP亚细胞定位实验表明,OsTPR1和OsERS1均能在细胞核和细胞质中表达,两者存在相互作用的可能性；酵母双杂交实验表明,OsTPR1与OsERS1及其关键功能域HisKA和HATPase_c有相互作用；双分子荧光互补实验表明,OsTPR1和OsERS1在洋葱表皮细胞的细胞质中有相互作用；GST pull-down实验中,我们确定了GST-TPR1, His-ERS1, His-GAF-HisKA, His-HisKA-HATPase_c和His-GAF-HisKA-HATPase_c的诱导表达。另外,我们成功构建了OsTPR1的过表达和RNAi干扰载体,并通过农杆菌介导的遗传转化方法获得K279(RNAi-TPR1)和K281(OE-TPR1)转基因水稻幼苗。本文根据OsTPRl与OsERS1及其关键区域的相互作用验证结果,进一步确定OsTPR1与OsERS1之间的相互作用及其主要特性,并推测两者共同参与了水稻乙烯信号转导通路。K279和K281转基因水稻材料的创建为深入剖析OsTPR1介导OsERS1参与水稻乙烯信号应答分子机制提供重要实验材料。
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