目的:1.探讨静压力对聚乳酸-乙醇酸聚合物（PLGA）支架上人牙龈成纤维细胞（HGFs）信号通路ERK1/2-c-Fos中细胞外蛋白调节激酶（ERK1/2）、磷酸化细胞外蛋白调节激酶（p-ERK1/2）、c-Fos及Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）表达的影响。2.探讨ERK1/2特异性抑制剂（PD98059）作用下,静压力对PLGA支架上的HGFs中ERK1/2、p-ERK1/2、c-Fos和COL-Ⅰ表达的影响,进而研究ERK1/2-c-Fos通路的机械力学信号转导机制以及人牙龈组织纤维化的相关机理。方法:1、本实验采用组织块培养法培养原代HGFs,然后将4-6代的HGFs接种于PLGA支架上,从而建立三维条件下的HGFs培养模型。2、在PLGA-HGFs培养模型上加载重力装置,使HGFs受到25g/cm~2的静压力,受力作用时间分别为0、3、6、12、24、48h。实验采用RT-q PCR和WB技术对HGFs中的ERK1/2、p-ERK1/2、c-Fos和COL-Ⅰm RNA与蛋白进行检测。3、将ERK1/2特异性抑制剂（PD98059）作用于ERK1/2-c-Fos信号通路,从而构建HGFs的ERK1/2-c-Fos信号通路抑制模型,抑制剂浓度分别为0μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM、40μM、80μM。细胞采用CCK-8技术检测上述不同浓度PD98059作用于细胞后的增殖活性,检测时间点分别是0、24、48、72h;无细胞毒性且有抑制作用的PD98059（2.5μM、5μM、10μM、20μM）分别作用于HGFs后,采用RT-q PCR技术检测细胞中ERK1/2m RNA的表达情况。4、将最适抑制浓度为10μM的PD98059加入PLGA-HGFs复合体培养模型中,然后加载大小为25 g/cm~2的静压力,时间分别为0、3、6、12、24、48h。然后分别检测HGFs中ERK1/2、p-ERK1/2、c-Fos和COL-Ⅰ的表达量。结果:1、使用组织块培养法培养出了原代HGFs,HGFs传至4-6代后性状良好。取4-6代HGFs用于后续实验,在PLGA支架上接种HGFs,从而建立了三维条件下的PLGA-HGFs符合模型。2、将25 g/cm~2静压力施加于PLGA支架上的HGFs,作用时间分别是0、3、6、12、24、48h。实验结果显示:在静压力作用下,HGFs中ERK1/2、p-ERK1/2、c-Fos和COL-Ⅰ的m RNA和蛋白表达量均上调。其中,ERK1/2的m RNA和蛋白表达量在0-12h逐渐上升,在12 h时达到峰值,随后下降至正常水平;p-ERK1/2的蛋白表达量在0-3h逐渐上升,在3 h时达到峰值,随后下降至正常水平;c-Fos的m RNA和蛋白表达量在0-3 h逐渐上升,在3h时达到峰值,随后下降至正常水平;COL-Ⅰ的m RNA和蛋白表达量在0-24h逐渐上升,在24 h时达到峰值,随后下降至正常水平。COL-Ⅰm RNA和蛋白在表达时间上慢于ERK1/2、p-ERK1/2和c-Fos。3、不同浓度的PD98059对HGFs增殖活性的影响不同。在HGFs培养的过程中,当PD98059的浓度低于或等于20μM时,HGFs的增殖活性未受明显影响;当PD98059浓度高于20μM时,HGFs的增殖活性逐渐受到影响,且受到的抑制作用随着培养时间的延长而越明显。此外,不同浓度的PD98059对ERK1/2的特异性抑制作用也不同。当PD98059浓度为10μM时,PD98059对ERK1/2的抑制作用最为显著;4、将最适抑制浓度为10μM的PD98059加入PLGA-HGFs复合体后,无静压力作用的对照组中ERK1/2、p-ERK1/2、c-Fos和COL-Ⅰ的m RNA和蛋白表达量均逐渐下降,且最小值低于正常水平。静压力作用下的实验组中ERK1/2、p-ERK1/2和c-Fos的m RNA和蛋白表达量在0-3 h逐渐上升,在3 h时达到峰值,随后降低至正常水平以下;COL-Ⅰ的m RNA和蛋白表达量在0-6 h逐渐上升,在6 h时达到峰值,随后降低至正常水平以下。PD98059和静压力共同作用下的实验组中ERK1/2、p-ERK1/2、c-Fos和COL-Ⅰ的表达量均高于仅用PD98059处理的对照组。结论:1、实验成功建立了PLGA–HGFs复合模型及力学加载模型。2、静压力可提高HGFs中ERK1/2、p-ERK1/2、c-Fos和COL-Ⅰm RNA与蛋白的表达量,且ERK1/2-c-Fos通路参与HGFs力学信号传导。3、PD98059可抑制ERK1/2的表达,最适抑制浓度为10μM。4、ERK1/2-c-Fos通路参与了静压力对HGFs表达COL-Ⅰ的调控,PD98059可降低静压力对HGFs表达COL-Ⅰ的促进作用。