【摘 要】
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饲料及饲料原料中的真菌毒素可通过食物链广泛的扩散,极大的危害畜禽和人类。结合微生物发酵饲料优势和乳酸菌以及芽孢菌对真菌毒素的去除作用,筛选出可降解毒素的菌种,可节约饲料饲喂前的脱毒处理的成本和操作,并且增加饲料的营养成分、提高畜禽消化率和恢复已损伤的动物等,具有极大的经济前景和发展潜力。本研究的目的是筛选出应用于饲料发酵中的可降解黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）、呕吐毒素（De
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饲料及饲料原料中的真菌毒素可通过食物链广泛的扩散,极大的危害畜禽和人类。结合微生物发酵饲料优势和乳酸菌以及芽孢菌对真菌毒素的去除作用,筛选出可降解毒素的菌种,可节约饲料饲喂前的脱毒处理的成本和操作,并且增加饲料的营养成分、提高畜禽消化率和恢复已损伤的动物等,具有极大的经济前景和发展潜力。本研究的目的是筛选出应用于饲料发酵中的可降解黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）、呕吐毒素（Deoxynivalenol,DON）和玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）的菌株,主要工作和结果如下:（1）针对LB培养基,优化了用于检测其中DON含量的HPLC方法,优化后HPLC检测条件为:色谱柱型号Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）流动相乙腈-水（体积比10:90）,流速1.2 m L/min,柱温45℃,进样量20μL,检测波长220 nm。该方法检出限约为0.025～0.034μg/m L,定量限约为0.086～0.116μg/m L。（2）从12株产乳酸能力强的乳酸菌筛选出去除DON能力强的饲料发酵用乳酸菌为:鼠李糖杆菌NJ8、屎肠球菌RS1;从49株芽孢杆菌中筛选出可高效去除DON的菌株枯草芽孢杆菌BL-12和贝莱斯芽孢杆菌BL-14,16 h对DON降解率分别达78.98%和82.63%;对49株芽孢杆菌进行亚甲基蓝脱色和过氧化物酶活性筛选,筛选出4株对三种真菌毒素AFB1、DON和ZEN中的两种或两种以上有较高降解率的芽孢菌菌株:枯草芽孢杆菌BL-10、蜡样芽孢杆菌BL-17、蜡样芽孢杆菌BL-24和枯草芽孢杆菌BL-31。其中,菌株BL-17在三种毒素同时存在时对AFB1和ZEN两种毒素的降解率32 h分别达74.38%和98.31%。（3）以菌株BL-17为出发菌株,对其进行紫外和ARTP诱变育种与筛选,筛选出1株诱变菌株BL-17-27,32 h时对培养基中三种毒素AFB1、DON和ZEN降解率分别为63.81%、64.55%和100%。（4）将芽孢菌BL-12、BL-14、BL-10、BL-24、BL-31和BL-17-27各自配合两株乳酸菌RS1和NJ8进行厌氧和耗氧饲料发酵,并尝试将芽孢菌两两组合耗氧发酵饲料,最终确定发酵菌株BL-17-27、BL-24和NJ8、RS1,耗氧发酵饲料3 d对饲料原料中AFB1和DON的降解率分别能达到81.75%和79.86%,对ZEN的降解率则为100%。（5）优化了两株发酵用芽孢菌的液体培养基配方,菌株BL-17-27优化最佳培养基为2%蔗糖、0.8%胰蛋白胨、0.5%玉米浆、1%Na Cl、0.2%K2HPO4;菌株BL-24优化增殖培养基为2%蔗糖、0.8%豆粕粉、0.5%玉米浆、1%Na Cl、0.3%K2HPO4。测定菌株的生长曲线,确定菌株接种发酵饲料的时间为20 h。
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