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[目 的]通过采用AMD3100+G-CSF联合动员自体骨髓内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells,EPCs）进入外周血,采集该细胞经体外培养扩增、再局部移植于糖尿病小鼠（db/db）为动物模型的创面,并与正常小鼠（db/+）来源的EPCs移植效果作比较,探讨移植EPCs促进糖尿病创面血管化及愈合的机制及方法,为临床治疗提供参考。[方 法]以5-6周龄的db/+（100只）和db/db（70只）雄性小鼠为实验对象,采用AMD3100+G-CSF联合动员骨髓EPCs,体外扩增培养至第二代EPCs。取36只糖尿病小鼠,按随机数字表法分为注射生理盐水（NS）组、移植正常EPCs组（db/+-EPCs组）、移植糖尿病EPCs组（db/db-EPCs组）,每组12只,于背部制作面积为1cmx1cm的全层皮肤缺损创面。伤后即刻,分别于移植db/+-EPCs组、移植db/db-EPCs组小鼠创面4个位点注射PKH26标记的异常正常EPCs和第二代糖尿病EPCs悬液各50ul/位点,NS组小鼠分别于相同位置注射等量NS。伤后3、5、7、10、14、17天,取3组存活小鼠进行创面大体观察并计算创面愈合率。伤后3天每组取3只小鼠的创面组织行冰冻切片在荧光显微镜下观察PKH26标记的EPCs生长及迁移情况。伤后7、14、17天,每组各取创面大体观察后的3只小鼠处死,取创面组织检测。各组取材的创面组织行HE染色观察肉芽形成情况;免疫组织化学法检测创面组织新生血管密度（CD31）,Masson染色检测创面组织胶原纤维沉积量,实时荧光定量反转录PCR法和蛋白质印迹法分别检测创面组织EPCs的VEGF、SDF-1、CXCR4的mRNA和蛋白表达。使用SPSS17.0统计软件处理所有的数据,计量资料采用均数±标准差表示,多组间处理采用单因素方差分析和析因分析,并对p值进行Bonferroni校正。[结 果]1)伤后3、5天,3组小鼠创面愈合率相近（p>0.05）;伤后10天,移植db/db-EPCs组小鼠创面愈合率与注射NS组相近（p>0.05）,其余各时间点移植db/+-EPCs组、移植db/db-EPCs组小鼠创面愈合率明显高于注射NS组（p<0.05或p<0.01）。各时间点,db/+-EPCs组小鼠创面愈合率与db/db-EPCs组相近（p>0.05）。2)伤后 7 天,db/+-EPCs 组、db/db-EPCs 组、NS 组创面组织CD31阳性细胞数差异无统计学意义（p>0.05）;伤后14、17天,db/+-EPCs组、db/db-EPCs组小鼠创面组织CD31阳性细胞数高于NS组（p<0.05）;伤后14天,db/+-EPCs组小鼠创面组织CD31阳性细胞数高于db/db-EPCs组（p<0.05）;伤后17天,db/+-EPCs组小鼠创面组织CD31阳性细胞数与db/db-EPCs组相近（p>0.05）。3)伤后7天,db/+-EPCs组、db/db-EPCs组、NS组创面组织的胶原纤维沉积量相近（p>0.05）;伤后14、17天,db/+-EPCs组、db/db-EPCs组小鼠创面组织的胶原纤维沉积量高于NS组（p<0.05）;伤后14天,db/+-EPCs组小鼠创面组织的胶原纤维沉积量较db/db-EPCs组稍多,但差异无统计学意义（p>0.05）;伤后17天,db/+-EPCs组小鼠创面组织的胶原纤维沉积量高于db/db-EPCs 组（p<0.05）。4)伤后 7 天,db/+-EPCs 组和 db/db-EPCs 组的 VEGF、SDF-1、CXCR4 的 mRNA 表达量明显高于 NS 组（p<0.05,p<0.05,p<0.05）,db/+-EPCs 组的 CXCR4、SDF-1 的 mRNA 表达量高于 db/db-EPCs 组（p<0.01,p<0.05）,db/+-EPCs组的VEGF的mRNA表达量较db/db-EPCs组稍多,但差异无统计学意义（p>0.05）;伤后14天,db/+-EPCs组和db/db-EPCs组的VEGF、SDF-1、CXCR4 的 mRNA 表达量明显高于 NS 组（p<0.005,p<0.005,p<0.01）,db/+-EPCs 组的 CXCR4、SDF-1 的 mRNA 表达量高于 db/db-EPCs 组（p<0.05,p<0.05）;伤后 17 天,db/+-EPCs 组和 db/db-EPCs 组的 VEGF、SDF-1、CXCR4的 mRNA 表达量明显高于 NS 组（p<0.05,p<0.01,p<0.01）,db/+-EPCs 组和db/db-EPCs 组的 VEGF、SDF-1、CXCR4 的 rmRNA 表达量相近（p>0.05）。5)伤后 7 天,db/+-EPCs 组和 db/db-EPCs 组的 VEGF、SDF-1、CXCR4 的蛋白表达量明显高于 NS 组（p<0.05,p<0.01,p<0.05）,db/+-EPCs 组的 CXCR4、SDF-1的蛋白表达量高于 db/db-EPCs 组（p<0.01,p<0.05）,db/+-EPCs 组的 VEGF 的蛋白表达量较db/db-EPCs组稍多,但差异无统计学意义（p>0.05）;伤后14天,db/+-EPCs组和db/db-EPCs组的VEGF、SDF-1、CXCR4的蛋白表达量明显高于NS 组（p<0.05,p<0.01,p<0.05）,db/+-EPCs 组的 CXCR4、SDF-1 的蛋白表达量高于 db/db-EPCs 组（p<0.05,p<0.05）;伤后 17 天,db/+-EPCs 组和 db/db-EPCs组的VEGF、SDF-1、CXCR4的蛋白表达量明显高于NS组（p<0.05,p<0.01,p<0.05）,db/+-EPCs 组和 db/db-EPCs 组的 VEGF、SDF-1、CXCR4 的蛋白表达量相近（p>0.05）。[结 论]不论经体外培养扩增的糖尿病EPCs,还是异体正常的EPCs移植均可通过促进血管生成、创面肉芽组织形成、胶原纤维沉积等机制促进糖尿病小鼠创面愈合。动态检测结果显示糖尿病EPCs体外培养仅可部分恢复细胞生物学活性,而异体正常EPCs移植具有短效性,这可能是两者创面愈合率比较并无明显差异的原因。针对各自缺陷进一步研究、突破可望获得更好效果。