目的探索宏基因组测序技术检测正常中耳微生物的有效性,明确正常中耳腔内微生物的组成特征,为中耳感染性疾病的治疗提供理论依据。方法收集于我院接受人工耳蜗植入术、镫骨底板开窗术及侧颅底良性肿瘤切除术患者（20耳/18人）的中耳拭子,以无菌生理盐水的阴性对照,利用宏基因组测序技术对样本中提取到的DNA进行测序并进行物种注释,分析正常中耳内微生物的组成特征。结果1.宏基因组测序技术于17例中耳拭子样本中检测到微生物,3例中耳拭子样本及20例阴性对照样本中未检测到微生物。2.通过对成功检测到微生物的样本在门层面进行物种组成分析,平均相对丰度由高到低的5个门类依次为变形菌门、放线菌门、厚壁菌门、拟杆菌门、衣原体门。在物种层面,总样本平均相对丰度最高的物种为痤疮丙酸杆菌,其次为金黄色葡萄球菌、沙眼衣原体、生丝微菌、变形链球菌。结论正常中耳内存在条件致病微生物,但其含量较低。涉及中耳的手术,围术期应警惕术区感染。宏基因组测序技术可以有效地将正常中耳腔内的微生物在种水平进行分类。痤疮丙酸杆菌在正常中耳内的相对丰度最高,其次为金黄色葡萄球菌、沙眼衣原体、生丝微菌、变形链球菌。中耳相关区域的感染可能与中耳内各微生物相对丰度的改变有关,但各细菌的相互作用有待进一步研究明确。