论文部分内容阅读
本文以2-甲基-2-噁唑啉(2-methyl-2-oxazoline,MOZ)为单体通过阳离子开环聚合反应成功合成一端为羟基的聚(2-甲基-2-噁唑啉)(poly(2-methyl-2-oxazoline),PMOZ),并将其与胆固醇甲酰氯(Cholesteryl chloroformate,CHM)酯化偶联合成PMOZ-胆固醇氯甲酸酯[poly(2-methyl-2-oxazoline)-cholesteryl methyl carbonate,PMOZ-CHMC],分别通过核磁共振氢谱(Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy,~1H-NMR)和红外光谱(Infrared Spectroscopy,IR)对得到的低聚物进行结构确证,通过酸碱滴定实验证明PMOZ-CHMC具有一定的酸敏性。建立了化疗药物多烯紫杉醇(Docetaxel,DOC)以及荧光模型药物香豆素-6(Coumarin-6,C6)的含量测定方法,分别为高效液相色谱法和荧光分光光度法,并对两种模型药物的含量测定方法进行了系统的方法学考察。。采用薄膜分散法制备普通空白脂质体(conventional liposome,CL)、多烯紫杉醇脂质体(Docetaxel Liposome,DOC-L)和香豆素-6脂质体(Coumarin-6 Liposome,C6-L)。通过后插入法分别将PMOZ-CHMC或者聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-Distearoyl Phosphatidylethanolamine,PEG-DSPE)修饰于制剂表面。葡聚糖凝胶微柱离心法测定DOC-L和C6-L的包封率分别为(89.59±2.61)%和(75.63±1.47)%。对脂质体的粒径、电位进行表征,DOC-L和C6-L的粒径分别为(78.67±0.22)nm和(117.07±0.12)nm,Zeta电位分别为(-5.77±0.47)mv和(-6.43±0.32)mv,经低聚物胶束修饰的脂质体Zeta电位略有增大而粒径无明显变化。制剂在10%胎牛血清中孵育测定透光率的变化,经PMOZ-CHMC和PEG-DSPE修饰的脂质体稳定性较CL均有所增加。不同p H条件下脂质体粒径测定和体外释放结果表明,与CL比较,PMOZ脂质体与PEG脂质体的稳定性均有显著增加,而与CL和PEG脂质体不同的是,PMOZ脂质体在p H 6.4时粒径和释放率变化相对较大,表现出一定的p H敏感性。荧光酶标仪和荧光显微镜定性定量结果表明结肠癌细胞对制剂的摄取量依次为:PMOZ-C6-L>C6-L>PEG-C6-L,p H值降低,PMOZ-C6-L细胞摄取量显著增加,表现出一定的p H敏感性。细胞毒结果表明三种不同的DOC-L对结肠癌细胞都有一定的毒性,并且随着制剂包载药物浓度的增加细胞存活率明显降低,当p H由7.4降至6.4时只有PMOZ-DOC-L细胞存活率明显降低,表明PMOZ-CHMC赋予脂质体一定的酸敏性。