α-糜蛋白酶广泛应用于医药、化工、环保、食品、饲料、纺织等工业领域,因此,对α-糜蛋白酶活性的研究具有重要的实用价值和理论意义。由于α-糜蛋白酶本质是蛋白质,其活性容易受到物理和化学因素的影响而改变。为了提高α-糜蛋白酶的活性,前人做了大量研究工作。添加保护剂保护α-糜蛋白酶是一种非常简便的方式,但以往的研究几乎都集中在均相体系中。酶固定法是一种很有应用前景的方式,固定的α-糜蛋白酶稳定性好,重复利用率高;不足之处有酶负载率调控不方便、酶在固定过程中容易失活和酶固定操作时间长。用人工分子伴侣复性α-糜蛋白酶研究报道不多。本论文研究了含氟普朗尼克、苯酚修饰壳聚糖和邻苯二酚修饰壳聚糖三种类型功能材料与α-糜蛋白酶之间的相互作用。具体研究内容如下:1、概述蛋白质和蛋白结构,α-糜蛋白酶基本结构和应用,提高酶稳定性的方法,保护剂研究进展和酶复性研究进展。2、研究含氟普朗尼克表面活性剂与α-糜蛋白酶的相互作用。采用酶促动力学方法测量酶活性,荧光光谱法表征酶分子结构的变化和测量酶的热稳定性。酶活性数据表明,含氟普朗尼克表面活性剂对α-糜蛋白酶活性几乎没有影响。α-糜蛋白酶荧光光谱数据表明含氟的普朗尼克表面活性剂能够导致α-糜蛋白酶内部结构的部分变化。不同温度下α-糜蛋白酶活性随时间的变化数据表明含氟普朗尼克表面活性剂不能改变α-糜蛋白酶的热稳定性能。3、研究含氟普朗尼克表面活性剂复性α-糜蛋白酶。采用正交实验确定含氟普朗尼克表面活性剂不能复性完全变性的α-糜蛋白酶。含氟普朗尼克表面活性剂也不能复性部分变性的α-糜蛋白酶。4、研究壳聚糖酚类衍生物与α-糜蛋白酶的相互作用。采用还原氨化的方法合成苯酚修饰壳聚糖和邻苯二酚修饰壳聚糖,1H核磁共振谱证明得到目标产物,同时确定了壳聚糖上取代度。采用原位共沉淀的方法固定α-糜蛋白酶,结果表明苯酚修饰壳聚糖的酶负载率和包封率随取代度的增大先降低后升高,邻苯二酚修饰壳聚糖中α-糜蛋白酶负载率和包封率随取代度的增大而增大。测定苯酚修饰壳聚糖中α-糜蛋白酶的活性发现,在低取代度时α-糜蛋白酶的活性得到部分提高,在高取代度时α-糜蛋白酶活性降低。测定邻苯二酚修饰壳聚糖中α-糜蛋白酶的活性发现,酶的活性随取代度的增大而增大,在取代度67%的邻苯二酚修饰壳聚糖中α-糜蛋白酶的活性是醋酸缓冲溶液中的20倍。所得结果表明含氟普朗尼克表面活性剂在α-糜蛋白酶保护和α-糜蛋白酶复性上需要做进一步的研究。苯酚修饰壳聚糖对α-糜蛋白酶的活性具有一定的保护作用,而邻苯二酚修饰壳聚糖具有较好的保护α-糜蛋白酶活性的能力。