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近几年,随着不合理耕作、施肥、人为活动影响,土壤盐渍化越来越严重,这对农业生产、植物栽培、农林绿化产生了很大的制约作用。当前开发盐渍化土地和发展海水农业开始成为世界研究的热门领域。近年来,通过基因工程方法将耐盐性基因转入植物,使植物的耐盐性得到了明显改善。本研究的实验材料为导入红海榄总DNA的耐盐番茄和未导入的野生型番茄,从4～5片真叶期开始分别用调和海水(约1.07%盐度)和自来水灌溉14天,对其生长情况和叶绿素、SOD活性生理生化指标进行分析研究。然后用BPP法提取植株根部的总蛋白质,通过等电聚焦和第二向SDS-PAGE电泳得到清晰的番茄根部总蛋白质双向电泳图谱。利用ImageMaster 2D platinum 6.0软件对双向电泳图谱进行分析,找出差异表达的蛋白点,并做好标记。同时,将这些特异的差异表达蛋白点外送北京华大蛋白质研发中心有限公司进行质谱分析(MALDI-TOF-MS),并将鉴定结果在蛋白质数据库中进行检索。然后筛选出与耐盐相关的差异蛋白点肽段,根据同源序列设计基因引物,用该引物对从耐盐番茄中提取的总RNA反转录成的cDNA进行PCR扩增,扩增产物进行测序,确定是否是我们要克隆的耐盐相关基因。获得的结果如下:1.盐胁迫下耐盐番茄植株生长状况和生理生化指标优于对照,表现出更强的耐盐性,实验结果对后续的耐盐性研究提供了必要性和可行性的依据。2.供试番茄根部全蛋白质双向电泳图谱大约有550个蛋白点,共检测到139个差异蛋白点,野生型番茄与耐盐番茄蛋白质表达量比值大于3或小于0.33的有16个,有4个特异蛋白点仅出现在用海水浇灌的耐盐番茄实验结果中。3.质谱鉴定与检索结果分析显示,从预测的功能来看,番茄盐胁迫下表达差异的蛋白可分为以下几种类型:(1)离子运输和渗透调节相关蛋白,如 Vacuolar H+-ATPase A1 subunit isoform;(2)物质和能量代谢相关蛋白,如 Succinate dehydrogenase、Enolase、NADH dehydrogenase;(3)氨基酸合成与基因调控相关蛋白,如Xylem cysteine proteinase 1-like、Proteasome subunit beta type-2-A-like;(4)抗逆性相关蛋白,如Annexin p34;(5)光合作用相关蛋白,如 Ketol-acid reductoisomerase chloroplastic-like、Dehydroascorbate reductase-like protein、2-Cys peroxiredoxin BAS 1-like chloroplastic-like;(6)预测的未知功能蛋白,如 14-3-3-like protein 16R、Uncharacterized protein LOC101263952;(7)其余的样品 R5、R6、R7、R26、R103、R115、R133、R134、R135 没有得到可信的结果。4.根据质谱结果设计液泡H+-ATP酶基因引物,并对从耐盐番茄中提取的总RNA进行反转录、PCR扩增,扩增产物进行测序。扩增的基因测序结果显示该序列与植物胁迫耐受紧密相关。