粗糙脉孢菌是研究微生物遗传学和分子生物学的模式真菌,是唯一的一个拥有基因组序列、功能基因组工具和全基因组基因敲除突变体库的丝状真菌。它是一种经典的模式生物,是实验室进行遗传学研究的常用菌株,其基因组中有6个聚酮类合成酶基因(polyketide synthase gene,pks),为pks-1～pks-6。根据PFAM蛋白家族数据库预测的结果显示pks-6基因簇由NCU02918～NCU02931这14个基因构成,而anti SMASH预测pks-6基因簇由NCU02913～NCU02926这14个基因构成,两个预测结果显示pks-6基因簇的基因组成不同。本实验主要探究pks-6基因簇到底由哪些基因所组成以及部分调控基因之间的关系,具体做法是将野生型粗糙脉孢菌87-3和缺失突变型菌株ΔNCU02917、ΔNCU02919、ΔNCU02921和ΔNCU02931分别在正常条件和胁迫环境(牙签划线破坏、果蝇幼虫侵害、曲毛裸长侵害)下培养,分析其次级代谢产物和基因表达之间的差异,根据TLC、HPLC和QPCR的结果显示pks-6基因簇的界限可能存在于两个预测结果的跨度区域NCU02913～NCU02931内。该实验结果还说明了部分调控基因之间的关系,比如缺失NCU02919基因后很难实现pks-6的高表达;当缺失突变体ΔNCU02919和ΔNCU02921遭受曲毛裸长跳吞食破坏后,NCU02917的表达量较高;ΔNCU02931在果蝇幼虫和曲毛裸长跳吞食后,NCU02917、NCU02919和NCU02921都呈现超低表达等结论。值得注意的是NCU02925基因存在于pks-6基因簇上,相关研究显示该基因不仅仅编码FAD结合/脱氢酶/单加氧酶,还与子实体的成熟有关。有研究发现粗糙脉孢菌pks-6(NCU02918)缺失突变体在有性生殖中其子囊果会正常成熟,也就是说尽管聚集在相同的基因簇中,但NCU02925(fbm-1)可能可以在子囊果成熟过程中独立于pks-6(NCU02918)之外工作。那么fbm-1在粗糙脉孢菌发育的哪些时期有高表达,又如何参与子实体形成等这些问题有待进一步研究。本实验首先将NCU02925(fbm-1)基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)结合,通过酶切连接插入载体pqa-5Myc-6His中形成重组质粒,电转化进入ΔNCU02925缺失菌株中,并且利用荧光显微镜观察是否存在绿色荧光以及其强弱,从而分析fbm-1在粗糙脉孢菌不同生长时期表达水平的强弱。根据荧光显微镜的观察结果显示,fbm-1在幼嫩的菌丝中不表达;菌丝成熟过程中有一定的表达量,更多的表达集中在分生孢子区域;同时在子囊孢子成熟的过程中呈现高表达,并确定在子囊孢子中间对称的两个位置上有高表达。本实验的结果对于NCU02925基因参与子实体形成这一功能做出了更进一步的解释。本论文的实验结果主要证明pks-6基因簇的界限可能存在于NCU02913～NCU02931之间,并说明了部分调控基因之间的关系,除此以外本论文还对NCU02925的功能做出了更具体的说明。