柑橘盆栽苗黄龙病病原脱除及检测的研究

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柑橘黄龙病是世界柑橘产业上的毁灭性病害,随着传播范围的扩大,危害程度也越来越严重。本研究采用小分子化合物以及小分子化合物结合金属离子化合物对携带黄龙病病原的盆栽苗进行病原脱除处理,筛选对黄龙病病原有抑制作用的配方;采用芽孢杆菌生物菌剂对携带黄龙病病原的盆栽苗进行处理,筛选对黄龙病有初步成效的菌剂,为柑橘无病毒苗木良种繁育提供依据;采用实时荧光定量PCR结合常规PCR检测方法对福建永春县、江西赣州市、海南琼中县三个地区送来的样品进行柑橘黄龙病病原进行检测;主要实验结果如下:1.小分子化合物黄龙病病原脱除处理:采用灌根的方式对微芽嫁接操作后仍为阳性的苗木进行小分子化合物病原脱除处理,3次处理后,黄龙病病原脱除率最高的是T3处理,达63.2%;将T3处理设置3个浓度梯度继续进行处理,发现T3(0.3ml/L)和T3(0.5ml/L)对1年生盆栽苗的病原脱除率均为40%,对5-6年生盆栽苗病原脱除率均为71.4%;用T3(0.5ml/L)对初步筛选3次处理和浓度筛选3次处理后仍携带黄龙病病原的植株进行加强处理3次,9次处理后,1年生盆栽苗的病原脱除率达100%,5-6年生盆栽苗病原脱除率达88.9%。用筛选的小分子化合物配方T3(0.5ml/L)对来自于江西赣州柑橘研究所感染黄龙病病原的植株进行验证实验,在经过3次灌根和6次输液管滴灌处理后,病原脱除率仅为33.3%,由此可见,T3对不同来源的柑橘苗木病原脱除效果存在差异。2.小分子化合物结合金属离子化合物M黄龙病病原脱除处理:初步筛选结果显示:T26+M处理的病原脱除率达75%,T23+M处理的病原脱除率达62.5%,T3+M处理的病原脱除率为43%,而H3+M的病原脱除率仅为22.2%。采用T23(0.5 ml/L)+M和T26(0.3 ml/L)+M、T26(0.5 ml/L)+M对初步筛选3次处理后仍带病的苗木进行输液管滴灌的方式进行处理,结果显示T26(0.3 ml/L)+M和T26(0.5 ml/L)+M处理的病原脱除率均为75%,高于T23(0.5 ml/L)+M处理的病原脱除率。用T26(0.5ml/L)+M对初步筛选3次灌根处理和3次输液管滴灌处理后仍带病的植株进行处理,脱毒率达87.5%。用筛选的小分子化合物配方T26(0.5ml/L)+M对江西赣州感染黄龙病病原的植株进行验证实验,经过3次灌根和6次输液管滴灌处理后,病原脱除率为66.7%。3.芽孢杆菌生物菌剂黄龙病病原脱除处理:采用芽孢杆菌生物菌剂GJ1、GJ2、GJ3对微芽嫁接操作后仍为阳性的柑橘苗进行黄龙病病原脱除处理,GJ1处理在2次处理后病原脱除率达100%。用江西赣州木虱接种黄龙病的盆栽苗进行验证实验,2次处理之后病原脱除率只有33.3%,说明芽孢杆菌生物菌剂对不同来源的黄龙病病株的脱毒效果存在差异。4.黄龙病病原的分子检测:采用荧光实时定量PCR结合PCR方法对福建永春县、江西赣州市和海南琼中县的样品进行检测,福建永春县2批14个样品的总检出率为92.9%,肉眼可见有黄龙病症状的样品分子检出率为90%;江西赣州市2批62个样品的总检出率为30.7%,肉眼可见有黄龙病症状的样品分子检出率达100%;海南琼中3批60个样品的总检出率为52.3%,肉眼可见有黄龙病症状的样品分子检出率达95.2%。
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