酿酒酵母SOD1基因在抗环境胁迫中的作用

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酿酒酵母Sod1p是铜-锌-超氧化物歧化酶,两分子Sod1p亚基与一分子Cu2+和一分子Zn2+组成具有生物活性的复合物,该复合物可以将细胞内O2-催化分解成H2O2,H2O2进一步被过氧化氢酶催化分解成H2O和O2,使细胞免受超氧基的损害。Ccs1p是Sod1p的铜离子伴侣蛋白,为Sod1复合物提供Cu2+。通过筛选酿酒酵母缺失株文库对Rap的敏感和抗性情况,我们发现酿酒酵母sod1和ccs1缺失株对Rap具有明显的抗性,且这种抗性与胞外Cu2+浓度有关,这说明sod1和ccs1缺失株对Rap的抗性是依赖于Sod1p的超氧化物歧化酶活性的。然后通过遗传学表型筛选的方法研究了Sod1p在多种胁迫响应中的作用,首次发现了sod1缺失株对SDS,CongoRed,pH 8.0的敏感表型,表明了Sod1p在细胞对这些胁迫条件耐受性方面发挥一定的作用。为了进一步研究SOD1基因的功能,我们构建了能够表达Sod1-HA融合蛋白的多拷贝质粒pHAC181-SOD1和单拷贝质粒pHAC111-SOD1,并通过功能互补实验验证了其具有生物学功能。通过序列分析,我们在SOD1的启动子部分发现了STRE序列,这暗示SOD1可能被胁迫转录因子Msn2/4p所调控。然后用Western Blot的方法,检测了在0.4 M NaCl存在情况下,野生型菌株及msn2/4缺失株中Sod1p的表达情况。从蛋白水平证明了,SOD1在高渗胁迫应答中发挥重要作用,且Msn2/4p参与对Sod1p表达的调控。
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