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PlcR调控元是一个广泛存在于苏云金芽胞杆菌中的多效调控系统,可以激活多种胞外蛋白的表达。这些蛋白在功能上与菌株营养供应(磷脂酶,蛋白酶,毒素)、细胞的防御与保护(细菌素,毒素,转运蛋白)以及环境变化监测(二组分感受器,趋化蛋白)等生理生化活动有关,可以帮助菌株克服不良环境的阻碍。PlcR还通过与PapR组成群体感应系统进行自身表达调控,因此,研究PlcR及其调控的功能对于深入认识苏云金芽胞杆菌的调控机制和病原性有重要的意义。
本研究通过同源重组的方法构建了苏云金芽胞杆菌Bti AND672以及无晶体突变株Bti IPS78/11的plcR基因缺失突变株,研究plcR敲除后对菌株的生长、芽胞形成、运动性、溶血活性、大质粒的接合转移能力等特性的影响。结果显示,Bti AND672ΔplcR和Bti IPS78/11ΔplcR与野生菌株Bti AND672和Bti IPS78/11相比生长特性无显著差别,且对芽胞和晶体的形成没有影响。突变株溶血活性丧失,运动能力有所降低。Bti AND672和Bti AND672ΔplcR都可以驱动小质粒pBC16转移到不含质粒的受体菌株GBJ002中,实验结果显示BtiAND672转移率是Bti AND672ΔplcR的3.7倍。这些表型的研究都可以帮助我们进一步认识苏云金芽胞杆菌PlcR-papR群体感应系统以及受其影响的菌株特性。已经有研究表明PlcR调控元并不是决定菌株毒力的唯一因素,细菌的鞭毛也与运动性和抗原性密切相关。因此我们比较了plcR基因突变株Bti4Q7Cry-ΔplcR及无鞭毛突变株Bti4Q7 Cry-ΔflhA对菌株芽胞形成、溶血活性、细胞毒性、大质粒的接合转移等特性的影响,了解FlhA和PlcR蛋白对菌株毒性影响的相关性。结果表明,Bti4Q7 Cry-ΔflhA芽胞形成率为5.97%,远低于Bti4Q7 Cry和Bti4Q7 CryΔplcR。和Bti4Q7 Cry-ΔplcR一样溶血活性丧失,细胞毒性也明显降低。在以GBJ001(pXO16)为供体,Bti4Q7 Cry-ΔplcR和Bti4Q7 Cry-ΔflhA作为受体菌株接合转移的转移率,分别与出发菌相差105倍和204倍。在三组分结合转移系统中,突变株作为受体接合转移的转移率,分别与出发菌相差10.3和27.3倍。