【摘 要】
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山羊绒来源于山羊皮肤的次级毛囊,是由次级毛囊干细胞诱导分化而形成。次级毛囊呈季节性周期生长,重复经历生长期、休止期、退行期这三个循环周期。本论文旨在将转录组与染色质图谱结合,从DNA水平到RNA水平较为全面的揭示次级毛囊干细胞周期生长中关键基因的调控机制。首先,我们对辽宁绒山羊的次级毛囊干细胞进行原代分离培养并进纯度鉴定;其次通过高通量转录组测序,获得了在绒山羊次级毛囊干细胞生长时期表达的RNAs
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山羊绒来源于山羊皮肤的次级毛囊,是由次级毛囊干细胞诱导分化而形成。次级毛囊呈季节性周期生长,重复经历生长期、休止期、退行期这三个循环周期。本论文旨在将转录组与染色质图谱结合,从DNA水平到RNA水平较为全面的揭示次级毛囊干细胞周期生长中关键基因的调控机制。首先,我们对辽宁绒山羊的次级毛囊干细胞进行原代分离培养并进纯度鉴定;其次通过高通量转录组测序,获得了在绒山羊次级毛囊干细胞生长时期表达的RNAs;最后,对次级毛囊干细胞进行组蛋白H3K27me3,H3K4me3,H3K36me3以及H3K79me2染色质免疫共沉淀试验。本试验主要研究了生长初期以及兴盛期辽宁绒山羊次级毛囊干细胞生长过程中的分子机制以及组蛋白甲基化对辽宁绒山羊次级毛囊干细胞生长过程中的调控。本研究主要结果如下:(1)辽宁绒山羊次级毛囊干细胞的分离培养与鉴定:利用两步酶法以及组织贴壁法对辽宁绒山羊次级毛囊干细胞进行体外的分离培养并进行细胞纯化。并通过观察体外培养细胞的形态以及细胞的增殖能力,根据结果显示本试验体外培养的辽宁绒山羊次级毛囊干细胞呈现鹅卵石铺路状生长且折光度较高,细胞形态较小并有数个细胞核,细胞的粘附力较强,综上我们体外培养的次级毛囊干细胞形态符合毛囊干细胞的形态。对毛囊干细胞特异标记基因进行鉴定,鉴定结果显示毛囊干细胞标记基因在本试验培养的辽宁绒山羊次级毛囊干细胞中有较高的表达。免疫荧光鉴定显示毛囊干细胞标记基因Krt14在本试验培养的辽宁绒山羊次级毛囊干细胞阳性率为99.5%以上,纯度较高。本试验成功进行了原代辽宁绒山羊次级毛囊干细胞的分离培养,获得辽宁绒山羊次级毛囊干细胞系。(2)通过对两个月份次级毛囊干细胞进行高通量转录组测序,得到28921个m RNAs,其中20441个有表达的RNAs.(3)通过高通量转录组测序和生物信息学分析,在生长初期和兴盛期找到147个差异基因,其中在生长初期上调的m RNA有44个;其中在生长兴盛期上调的m RNA有103个,生长初期上调的基因功能注释与毛囊的形态发生有关;兴盛期上调的基因功能注释与毛囊成熟相关(4)通过Ch IP-seq以及生物信息学分析得到了辽宁绒山羊次级毛囊干细胞全基因组组蛋白修饰图谱(5)通过H3K27me3,H3K4me3,H3K36me3,H3K79me2的染色质免疫共沉淀发现组蛋白修饰信号影响基因的表达,发生H3K4me3修饰的基因表达水平较高;发生H3K27me3修饰的基因表达水平较低。
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