基于扩增技术的microRNA和端粒碎片的检测及基于双功能核酸适体和银纳米簇的逻辑门构建

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wzy4225
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
核酸是生物体重要的组成成分之一,可分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。MicroRNA(miRNA)是RNA的一种,它广泛存在于病毒、动物和植物的细胞中。miRNA在动植物的发育、细胞生长分化和凋亡、脂肪代谢等生命活动中发挥着重要的调控作用。miRNA突变或异位表达与多种人类疾病有关。目前存在的多种检测miRNA的方法,可是这些方法或者检测限低,或者成本高,或者步骤多,因此建立一种简单、成本低、灵敏度高的miRNA检测方法非常必要。端粒是线状染色体末端的DNA重复序列,是线状染色体末端的一种特殊结构,能保护染色体末端免于融合和退化,在染色体的定位、复制、保护和控制细胞生长及寿命方面具有重要的作用。人的端粒是由重复的TTAGGG单元组成的,很容易形成G-四链体,G-四链体碎片可能在体液中存在,但目前尚没有检测端粒碎片的方法,所以建立一种简单、快速、灵敏度高的检测端粒碎片的方法非常必要。核酸适体是能够特异识别靶标的RNA、ssDNA或经修饰的核酸。经过二十多年的发展,核酸适体已被广泛应用到生物、化学、医学等多个研究领域。在本文中建立了检测miRNA的方法,检测端粒碎片的方法,以及用双功能核酸适体为模板合成了银纳米簇,并且用于构建分子逻辑门。   主要研究内容分为以下几个方面:   1.快速、灵敏的检测miRNA对miRNA本身的生物学研究及临床诊断有着重要的意义。在反转录-实时定量PCR技术的基础上,建立了一种灵敏度高、特异性好的miRNA检测方法。整个检测过程,包括反转录和定量PCR都在实时定量的PCR小管中一步完成。测定miRNA Let-7a的线性范围为0.1 amol到10fmol,检测限为12.6zmol。用此方法成功的从不同细胞中提取的小RNA中检测到了Let-7a。本方法不仅灵敏度高、特异性好、花费低,还可以实现高通量miRNA的分析。   2.快速、灵敏的检测端粒碎片对循环核酸的研究有着重要的意义。在本文中,在恒温扩增技术的基础上,建立了一种灵敏度高、特异性好检测端粒碎片的方法。用这个方法测定端粒碎片在细胞培养液中的线性范围为80pmol/L-900 pmol/L。用此方法成功地分析了不同的细胞培养基中端粒碎片,考察了阿霉素对MCF-7细胞和HeLa细胞培养液中端粒碎片浓度的影响。本方法灵敏度高、特异性好、花费低。   3.核酸适体是能够特异识别某一或某类靶标的RNA、ssDNA或经修饰的核酸。分别以双功能的核酸适体SA-ATP1,SA-ATP1-Y1,SA-ATP1-Y2,SA-ATP1-Y3,SA-ATP1-Y4为模板,用硼氢化钠还原法合成了银纳米簇,SA-ATP1-Y1,SA-ATP1-Y2,SA-ATP1-Y4银纳米簇具有红色的荧光。SA-ATP1-Y2银纳米簇荧光很强,与ATP和链霉亲和素的结合能力也很强,以其与靶分子的识别特性构建了分子逻辑门。  
其他文献
碳纳米管(CNTs)具有独特的细胞穿透能力,表面可以方便的进行功能化,具有良好的药物负载和释放能力,是一种备受关注的药物及生物分子输送载体。O-羧甲基壳聚糖(OMCS)作为天然多糖
脑神经化学过程的研究是涉及分析化学、生命科学等多种学科相互交叉的前沿研究领域。分析化学的发展促进了脑神经科学的发展,同时脑神经科学的发展也给分析化学提供了更多的机
出于对废热利用和绿色能源的追求,环境友好型且能实现热能与电能之间转换的热电材料已经引起了人们极大的研究兴趣。层状钴基氧化物热电材料具备大的热电势和电导率,较低的热导
英语听力教学是我国初中英语教学的薄弱环节,“哑巴英语”形象地表达了中国学生在英语学习过程中的困境。本文通过分析英语听力形成的动态过程,分析学生在听力能力动态形成三阶段中存在的问题,探究提高初中英语听力的对策。  一、初中英语听力三段论  听力指的是听者对目标语言进行接收、理解和提取相关信息存入长时记忆的一个过程。初中英语听力的完成包括三个阶段,第一,语言接收阶段。语言的接收指的是辨认目标语言的语法
研究分子自组装从而获得具有特殊功能的超分子材料,是超分子化学的重要目标。超分子自组装是在分子识别的基础上进行的,只有具备分子识别功能的分子才能保证超分子组装的有序性
心理学家赫洛克曾做过一个著名的“反馈效应”的心理实验,实验结果表明:及时对学习和活动结果进行评价,能强化学习和活动动机,对工作起促进作用。而且,即时反馈比远时反馈所产生的效应更大。这个效应提醒我们,有效的反馈机制是活动目标达成的必要条件,在课堂教学活动中,我们教师也应善于捕捉,在第一时间内有效收集学生准确、恰当的学习信息,然后及时对反馈的信息进行系统分析、总结经验,对存在的问题进行随时调节。这不仅
期刊
在语文教学中,教师们常常会遇到各种各样的挑战,提高学困生的成绩便是其中之一。初中生处于成长阶段,教师的积极引导有利于学生自我的提升。下面我就对学困生教学的策略加以论述,不足之处希望得到批评、指正。  一、学困生的成因  (1)心理叛逆  处于青春期的学生很容易产生反叛情绪,此时,家长、教师如果不从心理上对学生进行疏导,专断压制,学生的逆反情绪就会更为强烈。而学生反叛的具体体现就是不认真学习,消极怠
11月27日,天津高校研究生校园媒体联席会在南开大学举行。本次会议由《中国研究生》杂志天津通联站主办,《南开研究生》杂志社承办。南开大学党委研工部负责人、《中国研究生
近十年来,四硫富瓦烯(TTF)分子由于其独特的性质和结构,被广泛地应用在超分子化学及材料化学领域,而石墨烯作为一种sp2杂化的单原子层二维碳材料,拥有着极其优异的导电性和导热性