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单克隆抗体药物生物学活性检测项目是抗体质量控制中的一个关键指标。生物学活性与药效密切相关,为产品的有效和质量可控提供了重要保障。KM113抗体是由北京康明百奥新药研发有限公司研制的阿达木单抗生物类似药,建立KM113抗体生物学活性(结合活性和体外细胞生物学活性)方法及企业质量内控标准对该公司KM113成品的临床申报具有重要意义。本研究以KM113抗体(CKP-A20150704)为对照品,运用间接ELISA(酶联免疫吸附)法和细胞毒性法测定其生物学活性。通过对ELISA法和对细胞毒性法的建立及优化,并对以上两种方法的专属性、重复性、中间精密度和准确度进行验证,确定了KM113抗体生物学活性的检测方法。运用两种活性方法对三批KM113样品、三批市售生物类似药和三批KM113长期稳定性样品进行测定,依据中国药典单抗类产品质量标准及样品的测定结果,最终建立了 KM113生物学活性的质量标准。首先,建立了KM113单抗在两个活性方法,两种方法均存在明显的量效关系,且四参数方程R2均大于0.95。结合活性中,重复试验EC50平均值为(82.83±7.04)ng/ml,其RSD为8.50%,准确度验证的相对效价分别为(83.74±1.09)%和(120.43±4.04)%,对应的回收率分别为(104.68±1.36)%和(100.36±3.37)%,其RSD均小于 10%;细胞生物学活性中,重复试验IC50平均值为(27.63±1.73)ng/ml,其RSD为6.29%;中间精密度的IC50平均值分别为(27.57±0.12)ng/ml和(25.40± 1.59)ng/ml,其RSD为0.42%和6.25%,准确度验证的相对效价分别为(85.83±3.63)%和(115.90±2.93)%,对应的回收率分别为(107.29±4.54)%和(96.58±2.44)%,RSD均不大于10%。其次,对同一市售生物类似产品和对照品进行的三次平行实验,得到市售产品相对结合活性平均值为(96.67±7.64)%,RSD为7.90%,市售产品细胞生物学活性平均值为(101.00±7.21)%,RSD为7.14%;对三批次的KM113抗体和三批次的市售产品进行相对结合活性检测平均值为(98.97±4.09)%和(104.63±7.02)%,RSD为4.13%和6.71%,生物学活性平均值为(98.33±2.08)%和(93.00±2.65)%,RSD为2.12%和2.84%。依据检测结果和中国药典收录单抗质量标准,制定了生物学活性质量标准,即供试品相对结合活性应为对照品的70～130%,供试品细胞生物学活性应为对照品的 70～130%。本研究成功建立了KM113抗体的结合活性和体外细胞生物学活性的测定方法,并证明该方法的专属性强,精密度良好,准确度较高,为KM113样品生物学活性检测提供了切实可行的方法。通过样品活性分析结果成功建立了生物学活性的质量标准。