五倍子与刺梨天然提取物的复合抗氧化剂研究

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五倍子和刺梨均属于贵州省的特色自然资源,五倍子中的主要有效成分是单宁酸,刺梨中也富含多种生物活性物质,营养成分极其丰富,两种植物的提取物均具有清除自由基、抗氧化等多种作用。本文利用课题组之前研究得到的高纯度五倍子单宁酸与通过超声提取的刺梨冻干粉(由刺梨原汁冷冻干燥制成)中维生素C(VC)和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)进行复合抗氧化研究,试验采用单因素研究和响应面分析,确定VC的最佳提取工艺;同时采用热变性法提取SOD,确定SOD的最佳提取工艺。为探究五倍子提取物单宁酸与刺梨提取物VC和SOD在非脂体系中的单组分和复合物质抗氧化活性,建立DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)模型、ABTS(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid,2’-联胺-3乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)模型、FRAP模型(Ferric reducing antioxidant potential,铁离子还原)进行测定;利用FTC(Ferric thiocyanate,硫氰酸铁)法对三种抗氧化物质在油脂体系中对亚油酸过氧化抑制能力进行测定。同时结合等辐射分析法(Isobologram)评价单宁酸与VC、SOD的协同抗氧化效果,确定了两两复配后在非脂体系与油脂体系中的最优复配组合。该试验结果为五倍子与刺梨系列协同抗氧化活性的研究以及开发复合抗氧化剂提供理论参考,具体研究结果如下:1)本试验采用超声法提取刺梨VC得到单因素结果,结合响应面分析确定了最佳提取工艺为:2%偏磷酸提取溶剂、提取时间20 min、液料比28:1 m L/g,在此条件下得到刺梨VC含量为125.76±1.58 mg/g。在热变性法提取SOD试验中,得到最佳工艺条件为:提取温度60℃、提取时间15 min,酶活为2708±70 U/g。2)在非脂体系中,试验设置浓度范围内的单宁酸、VC、SOD对DPPH自由基清除能力的IC50值分别为11.68±0.07 mg/L、38.21±0.39 mg/L、73.56±1.16 mg/L;试验设置浓度范围内的单宁酸、VC、SOD对ABTS自由基清除能力的IC50值分别为3.18±0.11 mg/L、21.30±0.43 mg/L、23.40±0.37 mg/L;当样品达到试验所设置浓度的最大值时,单宁酸、VC、SOD的FRAP值分别为3413±31.03μmol/L、1502±35.88μmol/L、1003±33.03μmol/L。在油脂体系中,单宁酸、VC、SOD单组分的亚油酸氧化抑制率分别为90.19%±0.84%、11.84%±1.15%、3.17%±0.18%。3)在非脂体系中进行自由基清除试验,采用Isobologram分析法,结果显示DPPH自由基清除试验中单宁酸与VC、单宁酸与SOD复配后的效应点均落在相加线和95%可信限下方,相互作用指数(γ)均小于1,单宁酸-VC的复配物的协同作用强弱顺序为1:3>1:6>9:1>1:1=1:9>6:1>3:1,单宁酸-SOD复配物的协同作用强弱顺序为1:12>1:6>1:3>8:3>2:3=4:3>16:3;在ABTS自由基清除试验中,单宁酸与VC、单宁酸与SOD复配后的效应点均落在相加线和95%可信限下方,相互作用指数(γ)均小于1,单宁酸-VC的复配物的协同作用强弱顺序为1:9>9:1>6:1=1:3>1:6>3:1>1:1,单宁酸-SOD复配物的协同作用强弱顺序为1:12>16:3>8:3>1:6>4:3>1:3>2:3。研究证明在非脂体系中的单宁酸与VC、SOD均存在协同抗氧化作用。4)在油脂体系的试验中,结果显示单宁酸与VC复配比例为9:1、6:1、3:1、:1、1:3、1:6、1:9时的亚油酸氧化抑制率分别为60.23%±1.55%、60.47%±1.02%、53.06%±0.65%、34.73%±0.66%、19.58%±1.19%、7.58%±0.26%、4.17%±0.55%;单宁酸与SOD复配比例为16:3、8:3、4:3、2:3、1:3、1:6、1:12时的亚油酸氧化抑制率分别为94.58%±2.21%、82.66%±4.95%、55.81%±2.37%、39.93%±0.69%、21.47%±0.72%、17.58%±3.11%、7.54%±0.55%。研究证明在油脂体系中的单宁酸与VC不存在协同作用,单宁酸与SOD存在协同抗油脂氧化作用。
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