布鲁氏菌病(Blucellosis，以下简称布病)又称波状热、地中海热，是由布鲁氏菌引起的一种慢性人畜共患传染病。21世纪以来，无论是人间还是畜间，布病传播情况日益严重，对畜牧业的发展和人类的公共卫生安全都造成重大的威胁。家畜是本病最主要的传染源，对易感动物免疫布鲁氏菌病活疫苗是现在主要的防控措施之一。目前，布病活疫苗按表型差异主要分为两种：粗糙型(Rough，R)疫苗和光滑型(Smooth，S)疫苗。广泛使用的要属光滑型疫苗，免疫效果好，但是光滑型疫苗具有毒力强、安全性低、干扰疫苗免疫和自然感染的临床鉴别诊断的问题。粗糙型疫苗虽然毒力低、安全性高、不会干扰鉴别诊断，但是免疫保护力达不到理想效果。无论是光滑型疫苗还是粗糙型疫苗都有优点，也都有其使用局限，最理想的疫苗应该是免疫效果好，毒力低，安全性高，不干扰临床鉴别诊断。
　　本论文采用op诱导剂诱导出一株粗糙表型的羊种布鲁氏菌，命名为M227，并利用同源重组原理获得一株光滑表型的羊种布鲁氏菌缺失株，命名为Rev.1-ΔwadC。将上述两种菌株按不同剂量进行配比免疫小鼠进行初步评价，通过结合光滑型疫苗和粗糙型疫苗的优点，为进一步研制出一种新型有效的最理想的布鲁氏菌病RS双价疫苗提供参考。本文主要从以下三个方面进行研究：
　　1.粗糙型疫苗的诱导及鉴定
　　通过op诱导剂成功诱导出一株粗糙型布鲁氏菌，命名为M227，对M227的生物学特性及其对缺失片段的鉴定，并在小鼠模型中初步评价了M227最佳免疫剂量以及毒力。结果显示：M227缺失基因片段未知，且验证M227具有粗糙表型的特征，生长速度减缓，对非β-内酰胺类抗生素多粘菌素的敏感性增强；测得最佳免疫剂量为1010CFU，保护率为50%；在巨噬细胞感染模型中的胞内存活能力显著降低，在小鼠模型中早期感染的毒力显著低于亲本株。
　　2.光滑型疫苗的基因突变及鉴定
　　通过蔗糖敏感基因的负筛选技术，根据同源重组的原理成功获得了wadC基因无痕缺失的光滑型弱毒布鲁氏菌Rev.1-ΔwadC，研究wadC基因在布鲁氏菌中发挥的生物学功能，并在小鼠模型中初步评价了?wadC突变株的毒力。结果显示：?wadC的生长速度、在巨噬细胞感染模型中的胞内存活能力、对β-内酰胺类抗生素的耐受能力、以及在小鼠模型中早期感染的毒力均与亲本株无显著差异，但在骨髓来源的树突状细胞感染模型中的胞内存活能力、以及在小鼠模型晚期感染的毒力均显著低于亲本株。3.RS双价疫苗配比研究及有效性和安全性评价
　　通过不同剂量配比的布鲁氏菌诱导株M227与缺失株Rev.1-ΔwadC联合免疫BALB/c小鼠，根据最佳免疫剂量、血清学检测、脾脏出菌指数、免疫保护率、免疫后临床表现及其组织病理学变化，对RS双价苗的有效性和安全性进行评价。此外，剖杀采集小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏，正在切片染色，从组织的病变状态下分析免疫方式的保护效果。结果显示：RS双价苗的最佳免疫剂量为：Rev.1-ΔwadC免疫剂量103CFU/只与M227免疫剂量1010CFU/只，最佳免疫剂量免疫小鼠其保护率达到80%，表明RS双价苗具有较好的有效性；免疫小鼠精神、采食与健康状况良好，无临床异常情况，初步表明其具有较高的安全性；对免疫后的抗体研究显示，免疫小鼠只有低微的光滑型布鲁氏菌抗体，而粗糙型布鲁氏菌抗体水平则较高，有利于疫苗免疫与自然感染的鉴别诊断。