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背景抗SSA抗体是见于多种弥漫性结缔组织病如系统性红斑狼疮（SLE）、原发或继发性干燥综合症（SS）、亚急性皮肤型狼疮（SCLE）、新生儿狼疮（NLE）的重要自身抗体之一，与皮疹、外分泌腺体损伤以及粒细胞减少等多种临床症状密切相关。SSA抗原是一种广泛存在人体细胞内的异质性核糖核蛋白复合体，由52kd或60kd蛋白结合hYRNA构成，其抗原性主要存在于蛋白组分。随着60kd和52kdSSA抗原cDNA克隆成功，Harley等研究发现SSA抗原由一系列抗体结合表位构成，不同表位抗原性不同，不同抗表位抗体出现在不同疾病，或与同一疾病的不同临床表现相关。我科研究发现60Kd SSA抗原氨基酸多肽（MAP）310～323和482～495MAPs抗体阳性与唾液腺损伤具有正相关。Kurein等报道60Kd抗原与自身免疫性甲状腺疾病相关D1抗原存在交叉表位决定簇EKVK，抗SSA抗体可能通过此交叉表位造成SLE患者中性粒细胞减少。体外实验中SSA抗原在SLE和SS患者以及动物模型的细胞膜可以异位表达，部分SSA抗原表位免疫动物后出现表位扩展现象，并诱导出类似SS的腺体损伤。提示某些SSA表位在SS发病和脏器损伤中有重要作用，而且不同表位作用存在差异，可能存在优势致病性表位。抗SSA抗体可能是某些脏器损伤的致病性抗体。研究目的：利用已构建的抗SSA单链（ScFv）噬菌体抗体库，筛选SSA抗原表位特异性单克隆抗体（McAb），检测不同表位在受累器官的表达情况，判断器官受累是否与不同器官SSA抗原表位的表达存在相关性。方法：1．以赖氨酸为支架，八倍体合成上述3条氨基酸多肽链（MAP）:MAP 482-493:P1表位；MAP310-323:P2表位；MAP230-241:P3表位；2．利用已构建的噬菌体抗体库技术筛选并可溶性表达P1～P3表位特异性ScFvMcAb；3．检测SS患者受累唇腺组织和SLE和/或SS合并粒细胞减少患者中性粒细胞表面表位的表位表达情况；4．分析表达与组织器官受损的相关性。结果：1．验证-70℃冻存SSA特异性Scfv-pHEN2噬菌体抗体库库容1.08×1010cfu，完整插入片断插入率55.56％，有较好的多样性（MSP-1指纹PCR法）；2．通过优化实验方法，成功筛选获得了抗3种表位的含完整插入片断的克隆株（分别P1:3个克隆P2:6个克隆P3:4个克隆），其中3个克隆进一步由异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（ITPG）诱导以非抑制性大肠杆菌HB2151为宿主细菌成功可溶性表达，ScFv抗体由全细胞可溶组分提取并亲和层析纯化。经验证具有良好的特异性和亲和力，并拥有在体活性；3．阳性克隆的基因型与人胚系基因的比较提示来源于人类基因组，VH基因家族分析中，抗P2抗体中VH3家族占有50％，抗P3抗体中VH4家族占75％。3个抗体总体来看VH4家族和VH3家族比例最高分别有46.15％和23.08％。所有抗体的VL均来自κ轻链，且A家族明显占优势（P1:100％，P2:66.67％，P3:50％），同时抗原诱导下出现了较高的突变频率。4．免疫组化法检测SS受累唇腺活检标本P1～P3表位的表达情况，以腺管、泌管上皮细胞胞浆和胞膜着色为主，P1表位表达强度高于P2和P3表位，且P1表位表达强度与唇腺的炎性浸润程度呈正相关关系。5．SLE合并粒细胞减少患者和正常人中性粒细胞表面P3表位表达阳性率均明显高于P1、P2表位（流式细胞仪检测），在SLE合并粒细胞减少患者粒细胞表面P3表位与正常人相比表达明显上调，且表达阳性率与SLE患者粒细胞数量呈负相关关系；6．SLE和/或SS患者合并粒细胞减少者血清中抗P3抗体阳性率高于不合并粒细胞减少者，差异由统计学意义。SLE和SS合并粒细胞减少症组间抗P3抗体阳性率差异并无显著性。由此推断粒细胞减少可能并不是与SLE相关，而与相应抗体阳性相关。结论：1-SSA抗原表位在受累组织异位表达于细胞膜，从而可能打破免疫耐受，诱导机体产生致病性抗体；2．SS患者唇腺、SLE患者中性粒细胞上不同表位的表达情况存在差异，P1和P3表位分别是上述组织细胞的关键表位，表达程度与组织损伤相关。