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研究背景:严重创伤、烧伤及外科手术后常并发程度不等的增生性瘢痕,影响美观,甚至导致严重的畸形和功能障碍,降低患者生活质量。在增生性瘢痕形成过程中主要是成纤维细胞异常增殖与凋亡抑制、分泌和释放的正向与负向细胞因子调节机制的异常以及细胞外基质胶原合成与降解的失平衡。尽管已有很多研究证实增生性瘢痕与正常皮肤成纤维细胞之间存在差异,但导致增生性瘢痕形成的内在机制仍有待进一步阐明。微小RNA21(miRNA)作为内源性调控性RNA,广泛参与细胞增殖、分化、凋亡等病理生理过程。我们课题组前期研究显示人增生性瘢痕组织中miRNA表达谱较正常人皮肤有显著改变,其中miRNA-21表达变化比较明显,而有较多研究已证实miRNA-21在细胞异常增殖如肿瘤和多种纤维化的发生发展和演化过程中发挥了重要的调控作用。因此我们推测mi RNA-21可能参与增生性瘢痕的形成和演化过程。目的:观察miRNA21在体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞中的表达与调控变化,分析其与TGF-β1、Smad7、PDCD4、ColⅠ和Ⅲ型胶原表达变化的相关性,为深入阐明增生性瘢痕形成的新机制及治疗靶点提供理论依据和实验基础。方法:(1)采用组织块和酶消化相结合方法,体外培养人增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞,应用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法及免疫细胞化学等方法检测增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞中miRNA21、PDCD4、TGF-β1、Smad7、ColⅠ及ColⅢ基因和蛋白表达。(2)通过脂质体转染将mi RNA21模拟物导入人增生性瘢痕成纤维细胞中,采用荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测人增生性瘢痕成纤维细胞中mi RNA21、PDCD4、TGF-β1、Smad7、ColⅠ、ColⅢ的表达变化。(3)通过脂质体转染将miRNA21抑制物导入人增生性瘢痕成纤维细胞中,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测人增生性瘢痕成纤维细胞中miRNA21、PDCD4、TGF-β1、Smad7、ColⅠ、ColⅢ的表达变化。结果:(1)与正常皮肤相比,体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞miRNA21、TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ表达显著升高,而PDCD4低表达,miRNA21与TGF-β1呈正相关,与PDCD4呈负相关。(2)转染mi RNA21模拟物组人增生性瘢痕成纤维细胞miRNA21、TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ基因和蛋白表达均较对照组明显增强,而Smad7、PDCD4基因和蛋白表达均较对照组明显下调。(3)转染miRNA21抑制物组人增生性瘢痕成纤维细胞Smad7、PDCD4基因和蛋白表达较对照组明显上调,而TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ基因和蛋白表达均较对照组明显减弱。结论:(1)miRNA-21、TGF-β1、ColColⅠ、ColⅢ在体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞中的表达明显高于正常皮肤成纤维细胞,而PDCD4及Smad7表达显著低于正常皮肤成纤维细胞,可能参与增生性瘢痕的形成及演变过程;(2)miRNA21上调能促进体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ基因和蛋白的表达,抑制PDCD4、Smad7表达,可能是导致增生性瘢痕发生发展的重要因素之一。(3)miRNA21下调能减少体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达,增强PDCD4、Smad7基因和蛋白的表达,提示miRNA21可能作为增生性瘢痕治疗的新靶点。