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第一部分调肝解毒活血方治疗慢性萎缩性胃炎的临床观察目的:通过临床研究,观察调肝活血解毒方对慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)患者的临床疗效。方法:纳入肝郁瘀毒型CAG患者66例,随机分为治疗组和对照组,治疗组予调肝解毒活血方颗粒剂,1次1袋,1日2次。对照组予摩罗丹浓缩丸,1次1袋,1日3次。疗程24周,详细记录两组患者中医证候积分、胃镜表现及病理直观模拟评分治疗前后改变情况。观察两组患者血清胃蛋白酶原(PG)PGI、PGII、胃泌素-17(G-17)治疗前后的变化。结果:1.临床疗效分析:治疗组患者的中医症状积分与治疗前比较均有明显降低,且在改善胃脘灼痛,胁胀闷痛、口干口苦、大便干燥方面优于对照组(P<0.05);对照组患者的中医症状积分与治疗前比较均有明显降低,改善胃脘痞满症状方面效果优于治疗组(P<0.05);其它方面积分治疗组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。2.胃镜方面:治疗后治疗组胃镜下表现红斑、萎缩、糜烂及黏膜内出血积分均有改善,对照组红斑、萎缩方面有改善;治疗组红斑、萎缩改善明显方面效果优于对照组(P<0.05),糜烂及黏膜内出血两组改善均不显著(P>0.05),两组相比无显著性差异(P>0.05)。3.病理方面:治疗后治疗组对胃黏膜病理萎缩、慢性炎症积分改善的效果优于对照组(P<0.05),而在胃黏膜病理肠化、异型增生、活动性积分方面治疗组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。4.血清学指标分析:治疗后两组PGI、PGR水平较治疗前均有升高趋势(P<0.05),且治疗后两组PGII、G-17水平较治疗前均有降低趋势,治疗组优于对照组(P<0.05)。小结:调肝解毒活血方可以改善CAG患者的临床症状、胃镜病理状态以及异常的血清学指标,在治疗CAG方面具有良好的效果。第二部分调肝解毒活血方对慢性萎缩性胃炎模型大鼠的疗效研究目的:本实验以N-甲基-N’-硝基-亚硝基胍(MNNG)复合法建立CAG大鼠模型,观察调肝解毒活血方对CAG大鼠一般情况的影响,同时观察调肝解毒活血方对CAG大鼠腺体萎缩、肠上皮化生的治疗效果。方法:8周龄SPF级SD雄性大鼠90只,体重200±20 g,适应性喂养1周后,随机分为2组,即:空白组(BC)10只,CAG模型组(MC)80只。空白组给予正常饮食,自由饮水。CAG模型组予180ug/ml的MNNG溶液自由饮用联合水杨酸钠灌胃及饥饱失常饮食和夹尾法复制CAG大鼠模型,连续造模至第14周,至随机抽取的两只大鼠病理均显示为胃黏膜固有腺体萎缩伴肠上皮化生,表明造模成功。造模成功后CAG模型组随机分为5组:模型组,调肝解毒活血方高剂量组,调肝解毒活血方中剂量组,调肝解毒活血方低剂量组,摩罗丹组。正常对照组和模型对照组给予生理盐水灌胃。调肝解毒活血方高、中、低剂量组灌胃给药浓度分别为27.72g/kg/d、13.86g/kg/d、6.93g/kg/d。摩罗丹组给药浓度为0.50g/kg/d。灌胃容积l0ml/kg,每日1次,连续灌胃10周。实验结束后取胃窦处胃黏膜,制备胃黏膜上皮组织切片。HE染色、AB-PAS染色观察各组大鼠胃黏膜上皮萎缩、肠上皮化生情况。结果:1.HE染色显示空白组大鼠胃黏膜上皮细胞排列整齐,腺体形态规则,未见炎性细胞浸润,胃黏膜层厚。模型组胃黏膜腺体大部分萎缩消失,黏膜肌层增厚,间质内有炎性细胞浸润,部分淋巴滤泡形成,可见肠上皮化生;有不同程度的变性或坏死的脱落细胞,黏膜层变薄,腺体细胞排列紊乱,腺体呈囊状扩张,上皮细胞形态大小不一,间质水肿、充血;胃黏膜全层出现肠上皮化生,可见大量杯状细胞。摩罗丹组大鼠胃黏膜呈粉红色,光泽度差,胃黏膜变薄、皱襞紊乱,见大量炎细胞浸润。间质水肿、充血、炎细胞浸润,区域黏膜可见大量肠上皮化生。调肝解毒活血方三个剂量组病理介于摩罗丹组与空白组之间,其中以调肝解毒活血方高剂量组病理改善最明显,调肝解毒活血方中剂量组次之,调肝解毒活血方低剂量组病理改善效果不明显。2.AB-PAS染色显示空白组大鼠胃黏膜上皮无蓝色肠上皮化生灶;模型组出现弥漫性肠上皮化生,调肝解毒活血方治疗后,肠上皮化生范围明显缩小,其中以调肝解毒活血方高剂量组和中剂量组改善最明显,低剂量组和摩罗丹组改善不明显。小结:调肝解毒活血方能改善CAG大鼠的病理变化,延缓萎缩、肠上皮化生的发展。第三部分基于JAK2/STAT3通路研究调肝解毒活血方干预慢性萎缩性胃炎模型大鼠疗效观察目的:观察JAK2/STAT3信号通路在CAG大鼠模型中的表达情况,探讨调肝解毒活血方对JAK2/STAT3信号通路关键因子的调控作用。方法:1.Elisa法检测IL-6、TNF-α表达;2.Real-time PCR检测JAK2、STAT3m RNA表达水平;3.Western Blot法检测大鼠胃黏膜组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达;4.免疫组化法检测大鼠胃黏膜组织Bax、Bcl-x L、Bcl-2 m RNA表达;5.TUNEL染色检测细胞DNA损伤情况。结果:1.Elisa法检测血清IL-6、TNF-α表达与空白组对比:模型组大鼠血清IL-6、TNF-α表达显著升高(P<0.05)。与模型组对比:调肝解毒活血方各剂量组和摩罗丹组大鼠血清IL-6、TNF-α表达均显著降低(P<0.05)。2.Real-time PCR检测JAK2、STAT3m RNA表达水平各组大鼠胃黏膜JAK2、STAT3 m RNA扩增曲线平滑,溶解曲线可见尖锐单峰,表明各组大鼠胃黏膜RNA扩增、溶解效果较好。与空白组对比:模型组大鼠胃黏膜JAK2、STAT3 m RNA表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组对比:调肝解毒活血方各剂量组和摩罗丹组干预后CAG大鼠胃黏膜STAT3 m RNA表达显著降低(P<0.05),但JAK2m RNA表达水平下降无统计学意义(P>0.05)。3.Western Blot法检测胃黏膜组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达与正常组相比,模型组大鼠胃组织p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3值升高(P<0.05)。与模型组相比,调肝解毒活血方各剂量组和摩罗丹组p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3值降低(P<0.05)。4.免疫组化法检测胃黏膜组织Bax、Bcl-x L、Bcl-2 m RNA表达与空白组相比,模型组大鼠胃组织Bax m RNA表达水平升高,Bcl-2、Bcl-xl m RNA表达水平降低(P<0.05)。与模型组相比,调肝解毒方各剂量组和摩罗丹组Bax m RNA表达水平不同程度的下降,Bcl-2、Bcl-xl m RNA表达水平不同程度升高(P<0.05)。5.各组大鼠胃细胞TUNEL阳性检测与BC组比较,MC组TUNEL阳性细胞显著增高(P<0.05);与M C组相比,调肝解毒方各剂量组和摩罗丹组TUNEL阳性细胞明显降低(P<0.05)。小结:调肝解毒活血方可能通过调控JAK2/STAT3信号通路及相关因子的异常状态,从而阻断甚至逆转慢性萎缩性胃炎向胃癌的转变。结论:1.调肝解毒活血方可以改善CAG患者的临床症状、胃镜病理状态以及异常的血清学指标,在治疗CAG方面具有良好的效果。2.调肝解毒活血方能改善CAG大鼠的病理变化,延缓萎缩、肠上皮化生的发展。3.调肝解毒活血方可能通过调控JAK2/STAT3信号通路及相关因子的异常状态,从而阻断甚或逆转慢性萎缩性胃炎向胃癌的转变。