论文部分内容阅读
目的： 为了解决目前裸花紫珠开发中存在的药效物质基础不明确，质量控制方法不统一，指标性成分不确定等问题。我们将利用高效液相色谱法（HPLC）建立裸花紫珠原药材与片剂的指纹图谱，通过分析找出其主要指标性成分，建立同时测定多个指标性化合物含量的方法，并对不同产地、不同采收期裸花紫珠原药材、不同批次的裸花紫珠片剂进行监测、分析。研究成果将为裸花紫珠原药材及其产品的质量评价提供科学的评价标准，最终促进以裸花紫珠原药材药物的现代化发展。 方法： （1）裸花紫珠药材及其片剂HPLC指纹图谱研究方法：以50%乙醇为提取溶剂，采用超声提取法制备样品，使用Agilent 1200高效液相色谱仪，Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm)，柱温为30℃，流动相：乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液( B)，梯度洗脱，0～8 min， 16%～20%A，8～12 min，20%～21%A，12～20 min，21%～21%A，20～45 min，21%～46.6%A；检测时间：45 min；流速：0.6 mL/min；检测波长：327 nm；进样量：10 μL。 （2）同时检测裸花紫珠中连翘酯苷B、毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷三种苯乙醇苷类成分含量的测定方法：以 50%乙醇为提取溶剂，采用超声提取法提取制备样品，Agilent 1200高效液相色谱仪，紫外检测器，流动相为乙腈和 0.4%磷酸水溶液（体积比为18.2:81.8），色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5μm），柱温为30℃，流速为0.8 mL/min，进样量为10 μL，检测波长327 nm，检测时间：25 min。 （3）快速辨别不同厂家裸花紫珠产品与紫珠属植物的指纹图谱方法：不同厂家产品以 50%乙醇超声提取制备样品；不同紫珠原料以水为溶剂，100℃水浴加热回流提取制备样品。使用紫外检测器， Agilent ZORBAX SB-C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm)，流动相：乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液( B)，梯度洗脱，0～15 min，16%～25%A，15～25 min， 25%～39.7%A，柱温为30℃，流速为1.0 mL/min，进样量为10μL，检测波长327 nm。 结果： （1）裸花紫株药材及其制剂HPLC指纹图谱方法精密度、稳定性、重现性均符合指纹图谱研究要求，供试品溶液制备简单，便捷。在此色谱条件下，裸花紫珠中各个化学成分能得到较完全的分离，其HPLC指纹图谱可用于裸花紫珠原料与片剂的鉴别及质量评价。通过检测111份不同产地、不同采收时间的裸花紫珠原料药材指纹图谱，并利用相似度分析、聚类分析、主成分分析等分析方法对其数据进行了分析，发现裸花紫珠药材质量与采收期密切相关，而且不同年份的相同月份采收的样品也存在较大差异，原因可能在于裸花紫珠为多年生木本植物，它的次生代谢产物的产生与积累存在有跨年度变化。而裸花紫珠的产地对其指纹图谱影响较小。比较了50批裸花紫珠片的指纹图谱及有效成分的含量差异，结果表明批次间样品的质量存在差异；结合药材指纹图谱的结果发现：不同批次产品质量与原料的质量和处理方法有关。 （2）在能同时检测裸花紫珠中连翘酯苷 B、毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷三种苯乙醇苷类成分含量的测定方法中，连翘酯苷 B、毛蕊花糖苷与异毛蕊花糖苷分别在0.936-4.680、1.852-9.260、2.140-10.700μg范围内线性良好（R2=0.9982，0.9999，0.9998），加标回收率分别为 100.07%、99.98%、97.78%，相对标准偏差分别为 1.50%、1.38%、0.92%。该方法简便、快速、准确，适用于裸花紫珠及裸花紫珠各剂型中三种苯乙醇苷类成分的含量测定。通过考察111批药材和5 0批不同批次裸花紫珠片剂样品发现，样品中连翘酯苷 B、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷成分含量变化趋势大致相同，不同批次的样品其指标性成分也存在差异。 （3）通过不同厂家裸花紫珠药品和裸花紫珠及其同属植物指纹图谱的比较，发现不同厂家裸花紫珠药品的指纹图谱有极其显著性差异，说明了该指纹图谱方法能有效的鉴别不同厂家裸花紫珠药品。 结论： 通过建立裸花紫珠的指纹图谱研究方法，获得了多批次裸花紫珠药材及九芝堂裸花紫珠片的指纹图谱，明确了连翘酯苷 B、毛蕊 花糖苷、异毛蕊花糖苷为其主要指标性成分。同时建立了三种指标成分含量测定方法，检测了样品中指标性成分的含量。指纹图谱检测结合指标性成分含量测定方法，综合评价了不同来源的裸花紫珠及裸花紫珠片的质量，分析了引起质量的差异的因素。利用指纹图谱方法分析不同厂家裸花紫珠药品和裸花紫珠及其同属植物样品，结果表明所建立方法可成为有效鉴别裸花紫珠药材及制品的真伪。本研究为有效控制裸花紫珠药材及其制剂质量，更深入开发和应用裸花紫珠提供科学依据。