基于miR-384-5p/Beclin 1信号轴探讨九龙藤总黄酮抑制自噬抗心肌缺血损伤的作用

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目的:探讨九龙藤总黄酮(Bauhinia Championii flavone,BCF)对心肌缺血损伤的作用及分子机制。方法:培养H9c2大鼠心肌细胞,建立心肌细胞OGD模型模拟心肌缺血缺氧,给予或不给予BCF预处理。以Giemsa染色法观察细胞形态,CCK-8检测细胞活力,ELISA检测细胞培养上清液中心肌肌钙蛋白I(c Tn I)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,观察BCF对心肌缺血损伤的作用;利用慢病毒感染构建过表达及敲减mi R-384-5p基因的H9c2稳转细胞株,双荧光素酶报告基因实验检测mi R-384-5p与Beclin 1的互作关系,荧光显微镜观察自噬流变化,q RT-PCR检测自噬相关基因表达,Western blot检测自噬相关蛋白表达。结果:BCF可明显改善缺氧心肌细胞形态、促进细胞存活、降低c Tn I及CK-MB含量,下调LC3、p62基因及Cathepsin D蛋白表达,上调p62蛋白表达,减少LC3-II/LC3-I比值,抑制自噬。另一方面,我们发现心肌细胞处于缺氧状态时,mi R-384-5p下调,BCF预处理可逆转mi R-384-5p的下调。此外,过表达mi R-384-5p提高心肌细胞存活率,降低LC3-II/LC3-I比值,下调Beclin1蛋白表达,上调p62表达,减轻自噬。双荧光素酶报告基因实验表明mi R-384-5p与Beclin 1具有互作关系,且mi R-384-5p基因负调节Beclin 1蛋白表达,验证了Beclin 1是mi R-384-5p的靶蛋白。上调mi R-384-5p增强BCF对自噬的抑制,而沉默mi R-384-5p则部分逆转BCF的自噬抑制作用;过表达Beclin 1可促进自噬的激活、减弱BCF抑制自噬的功能。结论:BCF介导mi R-384-5p/Beclin 1信号轴,抑制自噬,减轻心肌缺血损伤。
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