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目的1.研究小鼠长期暴露于杀虫剂鱼藤酮后的行为学改变,及小鼠中脑黑质区多巴胺能神经元病理变化情况。2.探讨鱼藤酮慢性PD小鼠模型脑黑质部α-syn蛋白表达改变,以及α-syn蛋白表达改变的时间规律。方法1.选取8周龄、健康、雄性C57BL小鼠30只;共分五组,每组小鼠6只。分组给药:第1组为对照组,每天给予背部皮下注射DMSO:生理盐水为3.5L:1g的混合液,1ml/kg;第2组至第5组为实验组,各组分别按照0.5mg/kg、1.0mg/kg、1.5mg/kg、2.0 mg/kg的剂量,予背部皮下注射鱼藤酮溶液;每日一次,连续注射40天。末次注射后3天,利用爬杆实验、游泳实验和自由活动实验进行行为学检测,观察各组小鼠的活动能力的变化情况;采用HE染色法、尼氏染色和DAB免疫组织化学法,观察黑质多巴胺细胞形态的改变、黑质酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase, TH)阳性多巴胺能神经元数量及α-syn表达量的改变。2.通过以上实验,筛选出适合剂量的鱼藤酮模型作为后续实验模型组,并重新造模。在末次注射后3d、30d、60d三个不同的时间点,利用爬杆实验、游泳实验和自由活动实验观察各组小鼠的行为学改变;采用HE染色法观察黑质多巴胺细胞形态改变;采用DAB免疫组织化学法检测黑质TH阳性的多巴胺能神经元数量的改变,同时用免疫组化法、RT-PCR技术检测α-syn在黑质区多巴胺能神经元的表达情况。结果1. 2.0mg/kg、1.5mg/kg注射组小鼠死亡率高,分别为100%和50%,放弃继续进行药物注射;1.0mg/kg鱼藤酮注射组小鼠有明显竖毛、震颤、动作徐缓、逃避反应慢等帕金森病样症状。爬杆实验、游泳实验和自由活动实验检测发现,实验组小鼠较对照组小鼠的活动能力明显减弱,并有显著差异(p<0.05),而0.5mg/kg鱼藤酮注射组和对照组没有明显差异。2.形态学检查结果:1.0mg/kg组小鼠HE染色发现鱼藤酮组小鼠黑质区多巴胺能神经元形态不规则;多巴胺能神经元尼氏染色发现尼氏小体较对照组减少;实验组小鼠中脑黑质部TH免疫组织化学染色阳性细胞数减少(p<0.05)。故选取1.0mg/kg鱼藤酮注射组作为后续实验动物模型。3.在造模完成后动态观察小鼠行为学发现,小鼠的行为学损害逐渐恢复;DAB免疫组织化学结果:①与对照组比较,3d实验组小鼠中脑黑质部TH免疫组织化学染色阳性细胞数减少31%~39%(p<0.05);在2个月的观察中发现,TH阳性多巴胺能神经元有所恢复,但是仍然交对照组少。②鱼藤酮实验组与对照组比较,鱼藤酮组小鼠中脑黑质部α-syn阳性染色增多,积分光密度值(IOD)增高,小鼠中脑黑质α-syn表达较对照组增加约30%,差别有显著性(p<0.05);并有α-syn阳性聚集体的形成。③实验组小鼠成模后2个月,其中脑黑质的α-syn表达仍较对照组高。4. RT-PCR结果显示:鱼藤酮实验组小鼠成模后3d时α-syn的mRNA明显增高;1月后恢复正常。结论1.鱼藤酮1.0mg/kg处理40d的小鼠能产生PD样的临床和病理改变,可作为研究PD的毒素动物模型。2.鱼藤酮1.0mg/kg处理40d的小鼠中脑黑质TH阳性多巴胺能神经元较对照组明显减少;α-syn表达增高并聚集,并能持续较长时间(2个月)。