【摘 要】
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目的探讨慢病毒介导的shRNA沉默SFRP5基因对人胰腺癌细胞PANC-1与CFPAC-1恶性表型的影响。方法将靶向SFRP5基因特异性shRNA慢病毒载体转染人胰腺癌细胞系PANC-1与CFPAC-1,设
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目的探讨慢病毒介导的shRNA沉默SFRP5基因对人胰腺癌细胞PANC-1与CFPAC-1恶性表型的影响。方法将靶向SFRP5基因特异性shRNA慢病毒载体转染人胰腺癌细胞系PANC-1与CFPAC-1,设立空白质粒转染两组细胞后作为阴性对照组,未处理细胞做为空白对照组。在荧光倒置显微镜下观察实验组与阴性对照组的细胞转染效率;应用real-time PCR及western blot检测转染前后胰腺癌细胞中SFRP5 RNA以及蛋白的表达;CCK-8实验检测胰腺癌细胞增殖能力;使用Transwell小室实验分析胰腺癌细胞侵袭能力;细胞划痕实验分析胰腺癌细胞迁移能力。结果荧光倒置显微镜下观察实验组与阴性对照组细胞转染效率均在80%以上,细胞传代48 h后,绿色荧光蛋白表达效率未见明显下降;real-time PCR和western-blot检测结果均表明成功建立稳定转染shRNA-SFRP5胰腺癌PANC-1、CFPAC-1细胞株;CCK8实验结果显示,SFRP5病毒转染组与阴性对照组及空白对照组相比细胞的增殖能力明显增加(P<0.01),阴性对照组与空白对照组间无明显差异;Transwell小室实验及细胞划痕结果显示SFRP5病毒转染组的细胞迁移能力明显高于阴性对照组及空白对照组(P<0.01),阴性对照组与空白对照组间无明显差异。结论SFRP5慢病毒干扰载体能有效抑制SFRP5基因在人胰腺癌PANC-1与CFPAC-1细胞中的表达,SFRP5可显著抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。
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