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弓形虫病(Toxoplasmosis)是一种严重的人兽共患寄生虫病，其常用的诊断方法包括病原学、免疫学和分子生物学诊断方法。但这些方法在特异性、简便程度、温度和试剂仪器要求等方面各有缺点。因此，建立一种既敏感、特异，又简便实用的弓形虫病诊断方法是迫切需要的。环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术通过具有链置换特性的Bst DNA聚合酶完成靶序列的扩增，仅需恒温加热就能扩增DNA，可以通过观察利用核酸染料染色观察而直接判定结果，具有简便、快速的特点。
本研究利用多拷贝的弓形虫AF146527基因为靶序列设计引物并建立了LAMP检测方法，以1.5％琼脂糖凝胶电泳观察扩增产物的方法对反应体系(包括镁离子、甜菜碱浓度)及反应条件(包括反应温度及反应时间)进行了优化。通过1.5％琼脂糖凝胶染色及PicoGreen染色确定LAMP检测敏感性并与常规PCR检测方法进行敏感性比较。结果表明，当采用6 mmoI/LMg<2+>、0.8mmol/L的甜菜碱的反应体系，63℃反应60min即可完成检测，所建立的弓形虫LAMP检测方法敏感性达到6.4pg质粒。采用LAMP的一对外引物作为常规PCR引物进行PCR扩增检测弓形虫的敏感性只有128pg，即采用LAMP方法检测弓形虫的敏感性是常规PCR检测的20倍，直接采用PicoGreen染色观察也得到相同的结果，而且同球虫、隐孢子虫及猪组织DNA没有交叉反应。即环介导等温扩增检测技术(LAMP)是诊断弓形虫感染的简单快速方法。实际应用表明，该方法应用方便、快速，敏感性可以满足相关产品的检测需要。