金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)对肉鸡的损伤作用研究

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33日龄健康艾维因肉鸡72羽,经2周适应性饲养后,随机分为试验组和对照组,每组36羽,试验组经关节腔注射金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)50μg/ml1ml,对照组鸡只同部位注射等量灭菌生理盐水,隔离饲养,观察各组鸡只临床症状和病理变化,并于注射后第1、3、5、7、14、21d,各组取6羽鸡由贵要静脉采血,进行WBC计数及分类计数,同时做外周血的T淋巴细胞酯酶染色;取每羽鸡的各常规组织器官石蜡包埋、切片,HE染色,光镜观察组织病变;对肝、肾组织做自由基MDA含量及SOD活性检测;对肾、法氏囊做透射电镜取材、处理,电镜观察组织变化;对肾做TUNEL细胞凋亡检测;对肾做Bcl-2、Bax蛋白表达检测。通过以上指标的测定,以期探明SEB进入机体后,对机体的损伤作用。通过对外周血的WBC计数,其结果显示,试验组鸡只在注射SEB后第1d,白细胞数量迅速上升,到第3d上升到最高后,慢慢减少,到第21d下降到和对照组同一水平。其中第1、3、7d极显著高于对照组(p<0.01),第5、14d显著高于对照组(p<0.05),第21d和对照组差异不显著。WBC分类计数结果显示异嗜性粒细胞在第1d有所下降,但是和对照组差异不显著,在第14d上升到最高,显著高于对照组(p<0.05),第21d下降和对照组差异不显著;嗜酸性粒细胞在第1d显著高于对照组(p<0.05),其余时间段和对照组差异不显著;嗜碱性粒细胞在第1d极显著高于对照组(p<0.01),第14d显著高于对照组(p<0.05),其余时间段和对照组差异不显著;淋巴细胞在第1d极显著高于对照组(p<0.01),其余时间段和对照组差异不显著;单核细胞在整个试验周期,和对照组差异不显著。T淋巴细胞酯酶染色结果显示:试验组的T淋巴细胞在注射SEB后第1d开始上升,到第7d上升到最高,然后逐渐下降,第3d和对照组差异显著(p<0.05),第5、7、14、21d和对照组差异极显著(p<0.01)。肝、肾组织中MDA含量及SOD活性检测结果显示:在注射SEB后肝组织MDA含量立刻上升,在第1d显著高于对照组(p<0.05),第3d上升到最高,极显著高于对照组(p<0.01),第5d逐渐下降,但仍显著高于对照组(p<0.05),第7、14、21恢复到正常水平,和对照组差异不显著;试验组SOD活性在第1、5、7d显著低于对照组(p<0.05),第3d和对照组差异不显著,第21d极显著低于对照组(p<0.01);在注射毒素SEB后肾组织MDA含量立刻上升,且在整个实验周期内,试验组鸡只的MDA含量一直高于对照组鸡只水平,并在注射后第3d、7d、14d极显著高于对照组(p<0.01),在注射后第21d显著高于对照组(p<0.05);试验组SOD活性在注射后第1d极显著低于对照组(p<0.01);第21d显著低于对照组(p<0.05);第3d、5d、7d、14d和对照组差异不显著。肾组织TUNEL染色结果显示:试验组在前期(注射SEB后第1—5d),TUNEL染色呈阳性表达;到中后期(即注射SEB后第7—21d),肾脏组织中TUNEL染色呈阴性表达,对照组均为阴性表达。肾组织Bcl-2、Bax蛋白表达检测结果显示:在注射SEB后的第1、3、5d,Bax蛋白的表达较高;而Bcl-2蛋白在第5、7d的表达较高,其余时间段和对照组差别不大,均呈阴性表达。组织切片的光镜、电镜观察结果显示:SEB主要引起肾组织的损伤,在试验初期(即注射毒素后第1—5d),有轻微出血现象,同时在40倍光镜及油镜下能看到少量细胞呈凋亡性变化;中期(即注射SEB后第7—14d),光镜下发现肾小管上皮细胞出现坏死,核浓缩、碎裂,肾小球肿胀,充满囊腔,近曲小管上皮细胞发生变性、广泛性坏死,对第14d的‘肾脏做透射电镜检测,发现肾小管上皮细胞膜溶解,有的线粒体浓缩,有的线粒体肿胀,嵴断裂,细胞器崩解,形成空泡,核染色质边移,肾小球血管基底膜厚度增宽,足细胞足突少量融合,上皮细胞空泡样变、坏死;后期(即注射毒素后第21d),肾脏出血严重,整个肾小管上皮细胞几乎全部坏死,组织出现坏死灶。另外,肝脏、脾脏、法氏囊均表现出不同程度的细胞坏死性变化。由此,作者认为,通过关节腔注射SEB,其进入血液后能引起一定的炎症反应,由于其超抗原的特性,能激活外周血T细胞的大量增殖,同时,SEB能引起自由基的生成和代谢的紊乱,造成对机体的损伤作用。SEB作用的靶器官为肾组织,其对肾脏的损伤作用表现在诱导早期的细胞凋亡到后期的细胞坏死性变化。
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