【摘 要】
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研究背景:肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是人类肝脏原发恶性肿瘤的主要类型,大约占人类原发性肝癌的90%,其在世界范围内的发生率也正在逐年增加。乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染是HCC发展的主要危险因素,而在西方发达国家肝癌更常见的致病原因是与代谢综合征或高血糖有关的非酒精性脂肪性肝炎。在我国,肝细胞性肝癌是全国死亡率排位第三的恶性肿瘤,术后的5年生存率仅有50
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研究背景:肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是人类肝脏原发恶性肿瘤的主要类型,大约占人类原发性肝癌的90%,其在世界范围内的发生率也正在逐年增加。乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染是HCC发展的主要危险因素,而在西方发达国家肝癌更常见的致病原因是与代谢综合征或高血糖有关的非酒精性脂肪性肝炎。在我国,肝细胞性肝癌是全国死亡率排位第三的恶性肿瘤,术后的5年生存率仅有50%-70%。目前,通过多年的临床诊断和治疗发现肝癌存在预后差、易复发、病人生存率低等问题。且肝癌一旦发现多为晚期,手术切除、射线消融术、动脉化疗栓塞或肝移植等手段通常不能为该种情况下肝癌治疗的可行性选择。在这种情况下,使用酪氨酸激酶抑制剂,例如索拉非尼,进行系统化的治疗成为了一种可行的选择。服用酪氨酸激酶抑制剂会有30%的患者受益,然而服药6个月后会产生耐药性。患者面临加大剂量或者换二代酪氨酸激酶抑制剂的选择。然而,大剂量的化疗药物又会对患者的正常组织或者器官产生不可逆的损害。传统化疗药物用药也是一种临床治疗选择,但其用药剂量比较大,所以对人体产生的副作用也比较大,造成肝脏癌细胞周围正常细胞的死亡。相对而言,诱导肿瘤细胞衰老所需药物剂量比较小,对癌细胞周围正常的细胞杀伤力小且癌细胞失去了增殖转移的能力,延长晚期患者生存期。本研究首先探讨肌细胞增强因子（Myocyte enhancer factor,MEF2D）在耐索拉非尼的肝癌患者和动物中的作用;然后研究小剂量化疗药物诱导肝癌细胞衰老的作用以及MEF2D在衰老的肝癌细胞中的作用。本研究目的在于探讨MEF2D在肝癌发生发展中的作用。研究目的:第一部分,通过动物实验和临床数据研究索拉非尼在肝癌细胞中的耐药机制;第二部分,探究小剂量化疗药物阿霉素诱导肝癌细胞衰老的分子机制。研究方法:第一部分,我们对裸鼠皮下接种肝癌细胞敏感株PLC/PRF/5和肝癌细胞耐药株PLC/PRF/5-DR3以及服用索拉非尼的患者样本通过免疫组化和Western blot实验验证MEF2D在索拉非尼的肝癌样本中的过表达。随后在裸鼠皮下接种敲除MEF2D和SPRY4的PLC/PRF/5-DR3细胞,分为sg SPRY4+Lv-sh MEF2D-1;sg SPRY4+Lv-Scrambled;sg Control+Lv-sh MEF2D-1;sg Control+Lv-Scrambled处理组。通过免疫组化实验和Western blot实验验证MEF2D以SPRY4依赖的方式参与ERK激活和索拉非尼耐药。而在裸鼠皮下接种的PLC/PRF/5-DR3成瘤实验中给与HDAC4抑制剂和索拉非尼以探寻HDAC4与MEF2D复合物对SPRY4的表达的抑制。第二部分,小剂量化疗药物阿霉素对肝癌细胞的影响以及MEF2D在肝癌细胞衰老中的变化。我们通过SA-β-Gal染色和Western blot实验研究小剂量阿霉素对肝癌细胞衰老的影响。随后通过Western blot实验和q RT-PCR实验检测MEF2D的表达量。在肝癌稳转MEF2D的细胞中通过SA-β-Gal染色实验和Western blot实验验证MEF2D对阿霉素诱导的肝癌细胞衰老是否有影响。研究结果:1.在动物实验和临床数据中验证了MEF2D在索拉非尼耐药的肝癌样本中过表达,以及MEF2D以SPRY4依赖的方式参与ERK激活和索拉非尼耐药性。而通过HDAC4与MEF2D复合物抑制SPRY4的表达。HDAC4抑制剂与索拉非尼联合治疗肝癌,具有显著治疗效果。2.在研究小剂量阿霉素对肝癌的治疗效果时,我们发现小剂量阿霉素可以诱导肝癌细胞衰老,以及在衰老的肝癌细胞中MEF2D的表达水平降低。进一步的SA-β-Gal染色和Western blot实验证明了MEF2D过表达可以抑制小剂量阿霉素诱导的肝癌细胞衰老。研究结论:1.MEF2D在索拉非尼耐药的肝癌样本中过表达,以及MEF2D以SPRY4依赖的方式参与ERK通路的激活。HDAC4抑制剂与索拉非尼联合治疗有助于肝癌治疗。2.100n M阿霉素有助于促进肝癌细胞衰老,而在衰老的同时MEF2D的表达量降低。
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