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禽流感病毒(Aivan influenza virus,AIV)和新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是严重危害养禽业的两种重要传染病病毒。全球范围内,已发现多例野生禽类AIV和NDV共感染,但共感染对其病毒复制的影响及其机理尚不明确。本研究运用间接免疫荧光激光共聚焦技术、RT-qPCR、免疫印迹技术(WB)和ELISA检测分析了两种病毒共感染鸡成纤维细胞(DF-1)、人非小细胞肺癌细胞(A549)和非洲绿猴肾细胞(Vero)在前期感染(感染一种病毒前6 h,-6 h)、同时感染(两种病毒同时感染,0h)和后期感染(感染一种病毒后6 h,+6 h)三种共感染形式时对其核蛋白(nuclear protein,NP)在蛋白质水平表达的相互影响以及在细胞水平对病毒复制的影响,并对产生机理进行了初步分析,获得以下研究结果:1.NDV 强毒株 Herts/33(NDV)与 AIV 弱毒株 H9N2(AIV)分别感染 DF-1细胞,NDV、AIV感染后12 h可观察到明显细胞病变,24 h后细胞开始出现脱落。Western blot(WB)和RT-qPCR检测表明NDV和AIV均在感染8 h后病毒复制进入对数期,NDV在感染16-24 h后病毒复制进入稳定期,而AIV 8-24 h仍处于对数复制期。结合细胞病变效应结果,确定NDV和AIV感染后12 h和24 h作为共感染研究时间点。2.WB和IFA分析表明DF-1细胞中前期感染组(early infection group,EIG)12 h 时 NDV 显著抑制 AIV 复制(p<0.05),后期感染组(post infection group,PIG)和同时感染组(concurrent group,CG)中NDV极显著促进AIV复制(p<0.01),24 h时三个组中NDV均极显著抑制AIV的复制(p<0.001),表明共感染时NDV能下调AIV复制水平。AIV仅在EIG中抑制NDV复制,CG和PIG中AIV能显著促进NDV复制(p<0.05),表明共感染时AIV能促进NDV复制。A549细胞中,共感染12时三个组中NDV均显著抑制AIV复制(p<0.05),24 h时NDV均极显著抑制AIV复制(p<0.001),表明共感染时NDV抑制AIV复制;除PIG 24 h时AIV显著促进DNV复制(p<0.05),12 h时三个感染组中AIV极显著抑制NDV复制(p<0.001),24 h时EIG和CG中AIV极显著抑制NDV复制(p<0.001)。表明AIV和NDV共感染DF-1和A549细胞时两种病毒复制之间存在一定程度相互抑制作用,而Vero细胞中不存在这种抑制作用。3.ELISA检测表明AIV感染A549细胞时IFN-β表达稳定(600～400 pg/mL),NDV感染时表达自12h后显著提高,24h时保持稳定进入平台期,表达量最高达7758 pg/mL。共感染时NDV对AIV复制影响三个组中干扰素表达量均极显著提高(p<0.001);AIV对NDV复制影响中EIG和PIG中干扰素表达显著受到抑制(p<0.05),而CG中干扰素表达显著提高。表明IFN-β参与了 AIV和NDV共感染时对病毒复制的相互抑制。4.运用JAK信号通路抑制剂Ruxolitinib和Tofacitinib处理A549细胞,WB检测表明EIG和CG中药物单独处理或混合处理时NDV均能显著或极显著促进AIV复制,PIG中药物单独处理时AIV复制仍受到抑制,两种药物混合处理能显著提高AIV复制(p<0.05)。AIV对NDV复制影响中EIG中单独或混合使用药物AIV均能显著(p<0.05)或极显著(p<0.001)促进NDV复制,PIG和CG在药物单独处理时AIV能显著抑制NDV复制(p<0.05),联合用药时却能显著促进AIV复制(p<0.05)。进一步表明IFN-β中的JAK信号通路参与了 AIV和NDV共感染时对病毒复制的相互影响,其复杂机理有待深入研究。