葡萄白腐病菌拮抗放线菌的筛选、鉴定及发酵条件研究

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针对葡萄白腐病的拮抗放线菌,本试验主要进行了五部分的研究,包括拮抗菌株的分离和筛选、菌株的鉴定、发酵条件优化、发酵液理化性质研究及活性物质的提取,试验结果如下:1.对于采集到的土样,本研究采用平板稀释法进行菌株分离,结果70株放线菌被分离得到。通过初筛和复筛,发现3株放线菌对葡萄白腐病有较好的拮抗活性,其中菌株G4表现出最好的拮抗性,抑菌圈可达到26.5mm。菌株G4除对葡萄白腐病具有较强的拮抗活性外,对其它病原真菌,如禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum),玉米弯孢霉菌(Curvularia lunata),玉米茎基腐病菌(Fusarium moniliforme)等都表现出不同程度的拮抗性。2.对于放线菌菌株G4,本研究在形态特征、培养特征、生理生化特征方面进行了传统鉴定,结果表明其与已知的淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)存在很大的相似性;以16S rDNA序列为基础构建系统发育树,结合比对和聚类结果,菌株G4的16SrDNA序列与S. lavendulae (AB184415)的同源性可达100%,因此将菌株G4初步归为淡紫灰链霉菌。3.本研究对影响放线菌菌株G4抑菌活性的发酵条件进行了优化,确定其培养基最佳配方为:玉米粉6%,葡萄糖5%,大豆粉6%,硝酸钾0.7%,磷酸二氢钾0.1%,碳酸钙0.3%,氯化钠0.1%。最佳培养条件为:pH自然,种龄22h,装瓶量50mL/250mL,接种量4%,发酵温度28℃,转速200r/min,发酵时间48h。4.放线菌菌株G4发酵液的稳定性、极性及酸碱性试验结果表明:该菌株发酵液在100℃水浴中持续90min仍有活性,但不耐100℃以上高温,对紫外光和日光稳定,强酸弱碱中稳定,强碱中不稳定,纸层析结果表明,该活性物质极性较大,呈弱酸性。5.根据菌株G4发酵液的理化性质,采用发酵液与等体积丙酮混合沉淀法预处理发酵液,然后采用柱层析除去杂质,经过真空冷冻干燥等到粗品。
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