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目的构建表达乙肝病毒x基因(HBx)的肝前体细胞,并经小鼠门静脉注射建立肝内移植模型,取移植后小鼠肝组织,检测HBx表达、细胞周期蛋白cyclin D1的改变,为探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)对肝前体细胞的作用和影响及其在原发性肝癌(HCC)发病机制中的作用奠定了基础。方法将空载体Ad-GFP和表达HBx的腺病毒Ad-HBx-GFP分别感染小鼠肝前体细胞,Western blot法和实时定量PCR法检测HBx基因和蛋白在肝前体细胞内的阳性表达,经小鼠门静脉注射感染后的肝前体细胞,空白对照组注射等量生理盐水,3天,7天,14天分别取小鼠肝脏组织,冰冻切片镜下直接观察绿色荧光蛋白表达量,免疫组织化学法观察HBx阳性染色情况,Western blot法和实时定量PCR(real time-PCR)法分别检测HBx在蛋白质及mRNA水平的表达情况,设立空白组(注射等量生理盐水组)、14-19/Ad-GFP(空载体AD-GFP感染组)为对照组,以鉴定细胞移植后是否在小鼠肝组织内稳定表达；取移植后7天的小鼠肝组织,Western blot法和实时定量PCR法检测周期蛋白cyclinD1在蛋白水平和mRNA水平表达情况。结果经Ad-HBx-GFP感染后的肝前体细胞,通过western blot和PCR检测到HBx蛋白和基因的阳性表达,细胞移植后成功构建了表达HBx并靶向针对肝前体细胞的小鼠模型。1.绿色荧光蛋白表达量、免疫组化阳性细胞数量及血清ALT均在注射后第7天达到高峰,RT-PCR及Western blot均检测到第7天14-19/Ad-HBx-GFP组小鼠肝组织目的基因及蛋白的特异性表达,与14-19/Ad-GFP组及生理盐水注射组相比结果具有统计学差异。2.通过western blot和PCR检测注射后第7天小鼠肝组织的周期蛋白cyclin D1在蛋白水平和mRNA水平表达情况,阳性对照组14-19/Ad-HBx-GFP cyclinD1的mRNA和蛋白表达量较阴性对照组14-19/Ad-GFP和生理盐水注射组相比均有所增高(P>0.05)。结论1.成功构建了表达HBx并携带GFP荧光蛋白的肝前体细胞(14-19)：2.成功构建了表达HBx并靶向针对肝前体细胞的小鼠模型；3.第7天阳性对照组14-19/Ad-HBx-GFP cyclin D1的蛋白和mRNA表达量显著增加,HBx可能促进了肝细胞的增殖。