糖尿病肾脏病（Diabetic kidney disease,DKD）作为糖尿病最常见且危害严重的微血管并发症之一,发病率逐年升高,为社会经济和医疗卫生事业的发展带来了严峻的挑战。长期以来,现代医学在延缓疾病进展方面一直缺乏突破,中医学对疾病病因病机的认识不断丰富和深入,在疾病的防治方面积累了丰富的经验。“肾络微型癥瘕”是对糖尿病肾脏病中医微观病机的经典诠释,基于此理论的“消癥散结方”干预DKD在临床和基础实验研究方面均得到了一定的验证。本研究第一部分即基于“肾络微型癥瘕”理论,探索疾病不同分期中医证候的分布及特点,以期进一步诠释“肾络微型癥瘕”的宏观病机,同时为“消癥散结方”干预DKD提供依据。DKD发病机制复杂,目前可用的治疗手段都不能完全有效地阻止疾病进展,而中医药在疾病防治方面的优势和具体作用机制亟需进一步的探索与研究。本研究第二部分即以大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,以Sphk1/S1P信号通路介导DKD发病机制为切入点,研究“消癥散结方”干预高糖刺激下肾小球系膜细胞的效果和具体的作用机制。目的:1.以“肾络微型癥瘕”理论为基础,观察DKD不同分期中医证候分布特点以及与实验室指标的相关性,研究疾病不同分期中医关键病机的演变与特征,探索“肾络微型癥瘕”理论在疾病宏观证候上的体现与意义。2.以Sphk1/S1P信号通路参与DKD发病机制为切入点,研究高糖对肾小球系膜细胞的影响及Sphk1/S1P信号通路的表达情况;重点研究“消癥散结方”对高糖刺激下肾小球系膜细胞的保护作用以及对Sphk1/S1P信号通路的干预作用,为“消癥散结方”干预DKD具体机制的阐释提供依据,为进一步的药效学研究提供基础。方法:1.收集324例DKD患者的临床资料,比较观察疾病不同分期的临床特点。基于“肾络微型癥瘕”理论,将中医证候分为气虚证、阴虚证、气阴两虚证、阴阳两虚证以及气郁证、结热证、湿热证、浊毒证和血瘀证,研究各证候在疾病不同分期的分布情况,针对不同分期,将各中医证候积分与实验室理化指标进行相关性分析,并对重要指标进行逐步回归分析,研究疾病不同分期中医证候积分与实验室指标的关系。此外,探索性研究Sphk1在正常人、糖尿病和DKD患者不同分期中的表达以及与实验室指标的相关性。2.以大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,使用不同浓度高糖（5.6～50mmol/L）刺激不同时间（24h、48h和72h）,MTT法检测系膜细胞的增殖活力、流式细胞仪检测细胞周期;进一步使用30mmol/L的高糖刺激不同时间（24h和48h）,使用实时荧光定量PCR和Western Blot法检测细胞外基质分泌情况及Sphk1/S1P信号通路的表达情况。3.分别使用“消癥散结方”（低、中、高浓度）含药血清和厄贝沙坦含药血清以及S1PR2抑制剂（JTE-013）与高糖共同培养大鼠肾小球系膜细胞,48h后MTT法检测系膜细胞的增殖活力、总蛋白/细胞数估算细胞大小、流式细胞仪检测细胞周期以及实时荧光定量PCR和Western Blot法检测细胞外基质分泌情况及Sphk1/S1P信号通路的表达情况。结果:1.DKD以老年患者居多,普遍存在内脏型肥胖,部分患者的肾功能损伤与尿蛋白水平并不平行;随着疾病进展,患者血糖降低,血压升高,肾功能下降,尿蛋白增加,营养状况变差,FT3和TT3降低。2.DKD以本虚标实为特点,不同分期的中医证候分布及特点不同。本虚证在疾病早、中期以气阴两虚为主,疾病晚期以阴阳两虚为主。各标实证兼挟情况复杂,疾病早期以气郁、血瘀和结热证为主,结热证候积分与餐后血糖和eGFREPI呈正相关（r2hPBG=0.220,reGFR=0.193）;疾病中期以气郁、血瘀和湿热证为主,湿热证候积分与餐后血糖和HbA1c呈正相关（r2hPBG=0.268,rHbA1c=0.247）,HbA1c与湿热证候积分间的关系为y=7.991+0.112x（y为中期患者的HbA1c,x为中期患者湿热证候积分）;疾病晚期以血瘀、气郁和浊毒证为主,浊毒证候积分与eGFREPI和24-UTP存在相关性（reGFR=-0.351,r24-UTP=0.441）,血瘀证候积分与24-UTP呈正相关（r=0.373）,eGFREP1与浊毒证候积分间的关系为y=32.249-0.874x（y为晚期患者的eGFREP1,x为晚期患者浊毒证候积分）,24-UTP与浊毒证和血瘀证候积分间的关系为y=1.392+0.104x1+0.093x2（y为晚期患者的24-UTP,x,为晚期患者的浊毒证候积分,x2为晚期患者的血瘀证候积分）。3.与正常人相比,糖尿病患者血清Sphk1水平升高,DKD患者血清Sphk1水平降低;Sphk1与早期DKD患者血清ALB呈负相关（r=-0.413）,与中期DKD患者ESR呈正相关（r=0.451）,与晚期 DKD 患者 DBP 和 HGB 呈正相关（rDBP=0.376,rHGB=0.365）,与 HbA1c和 hs-CRP 呈负相关（rHbA1c=0.463,rhs-CRP=-0.380）。4.高糖对系膜细胞增殖活力和细胞周期的影响与葡萄糖浓度及刺激时间有关,早期以增殖为主,晚期以肥大为主。高糖诱导的系膜细胞ECM的过度分泌可能与细胞的增殖和肥大均有关系。5.高糖（30mmol/L）刺激系膜细胞可以引起Sphk1/S1P信号通路的激活,同时伴随着TGF-β 1和NF-κB（p65）的高表达,抑制S1PR2可以减轻高糖诱导的系膜细胞中FN、ColIV、TGF-β 1和NF-κB（p65）的过度表达,说明Sphk1/S1P信号通路可能是通过S1PR2参与高糖诱导的系膜细胞的异常改变。6.分别使用“消癥散结方”含药血清以及JTE-013干预高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞,48h后,与高糖组相比,“消癥散结方”组系膜细胞的增殖活力降低、细胞肥大有所减轻、细胞周期中G1期增加,S期减少,FN、ColIV、TGF-β 1、NF-κB（p65）、Sphk1和S1PR2的mRNA和蛋白的表达降低;JTE-013组FN、ColIV、Sphk1和S1PR2mRNA的表达降低,FN、TGF-β1、Sphk1和S1PR2蛋白的表达降低,中药“消癥散结方”的整体干预效果优于JTE-013。结论:1.DKD不同分期的中医证候分布及特点不同,随着病情的进展和恶化,本虚证由气阴两虚证向阴阳两虚证发展,兼挟气郁、结热、湿热、浊毒及血瘀证的动态演变,它们既是“肾络微型癥瘕”之微观病机致病于肾络,同时也是DKD之宏观病机体现于证候。2.与正常人相比,糖尿病患者血清Sphk1含量升高;DKD患者血清Sphk1含量降低;Sphk1与DKD患者部分实验室指标间存在一定的相关性且随着疾病的分期而不同。3.“消癥散结方”不仅可以部分逆转高糖诱导的系膜细胞增殖活力的增加、细胞肥大及细胞周期的异常改变;同时能够明显抑制高糖诱导的系膜细胞中FN、ColIV、TGF-β 1、NF-κB（p65）、Sphk1和S1PR2的过度表达;而Sphk1/S1P信号通路可能是“消癥散结方”的作用机制之一。基于“肾络微型癥瘕”理论的“消癥散结方”干预高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞的作用具有优效性和多靶标的特点。