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目的本研究采用电针干预多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)合并胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)大鼠,观察下丘脑LEP-POMC-KP-GnRH信号传导的变化,探讨电针能否同时改善PCOS合并IR生殖内分泌与代谢功能,并与干预中枢代谢-生殖信号间的关联性。电针的治疗作用为经络学“冲任”理论补充了新的内容,也为代谢信号传递至生殖中枢、并影响下丘脑-垂体-性腺轴的研究提供中医理论支持,可进一步为推广电针“调畅冲任”治疗PCOS提供临床依据。方法1.选用3周龄SD雌性大鼠,予以硫酸普拉睾酮钠皮下注射与高脂饲料喂养21d诱导建立PCOS合并IR模型,建模后继续高脂喂养。随机分为模型组(n=8)、西药组(n=8)、电针组(n=8)、针药组(n=8),空白组(n=6)。电针组采用三阴交、关元、中脘、后三里穴位电针治疗,西药组采用二甲双胍溶液灌胃治疗,针药组采用电针穴位与二甲双胍灌胃同时治疗,每组均治疗28d。2.生化指标检测,性激素水平:血清睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)及LH/FSH;糖代谢水平:血清空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);脂代谢水平:血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)及瘦素(LEP)。以及体质量、卵巢质量变化;苏木素-伊红染色观察卵巢形态学变化。3.下丘脑物质检测,实时荧光定量PCR法测LEP、POMC、KP及GnRH mRNA表达水平;蛋白质印迹法测LEP、POMC及KP的蛋白表达水平。4.以组织形态学和分子生物学方法观察上述疗效指标与下丘脑物质,比较各组治疗后糖脂代谢、生殖内分泌水平、卵巢形态学变化及下丘脑LEP-POMC-KP-GnRH信号途径中各物质水平变化。结果第一部分电针对PCOS合并IR模型大鼠的治疗作用研究模型组较空白组血清T、LH水平及LH/FSH值显著升高,FSH水平显著降低(P<0.01);血清 FPG、FINS 水平及 HOMA-IR 值显著升高(P<0.01);血清 TG、TC、LDL及LEP显著升高(P<0.01)。治疗后第2、3和4周体质量值增加(P<0.05,P<0.01,P<0.01);且体质量的增长趋势随治疗周数的增加而显著加快(P<0.01)。卵巢湿重显著升高(P<0.01),卵巢切片显示卵泡多见囊性扩张或封锁、无周期性变化,卵泡腔内亚结构多见消失,符合PCOS卵巢病理变化。治疗后生殖内分泌检测:(1)性激素指标:与模型组相比,西药组血清LH水平显著降低(P<0.01),血清T水平及LH/FSH降低(P<0.05),血清FSH水平无统计学差异(P>0.05);电针组血清LH水平及LH/FSH显著降低(P<0.01),血清T、FSH水平无统计学差异(P>0.05);针药组血清T、LH水平及LH/FSH显著降低(P<0.01),血清FSH水平显著升高(P<0.01),且血清T水平较电针组、LH/FSH较西药组和电针组降低更明显(P<0.01);血清FSH水平较西药组和电针组升高更明显(P<0.01)。西药组和电针组血清T、FSH水平及LH/FSH无统计学差异(P>0.05);西药组、电针组和针药组血清LH水平无统计学差异(P>0.05)。(2)卵巢病理:西药组、针药组卵巢湿重较模型组显著降低(P<0.01),电针组降低(P<0.05);西药组、电针组和针药组间无统计学差异(P>0.05)。卵巢切片染色显示,各治疗组卵巢结构较模型组改善,针药组较西药组和电针组恢复更显著,卵泡腔内亚结构与颗粒细胞排列趋于正常。治疗后代谢功能检测:(1)糖代谢指标:与模型组相比,西药组血清FINS水平、HOMA-IR降低(P<0.05);电针组HOMA-IR降低(P<0.05),血清FINS水平无统计学差异(P>0.05);针药组血清FINS水平、HOMA-IR显著降低(P<0.01),且针药组血清FINS水平、HOMA-IR均较电针组显著降低(P<0.01);HOMA-IR较西药组有统计学差异(P<0.05)。模型组、西药组、电针组和针药组间FPG均无统计学差异(P>0.05)。(2)脂代谢指标:与模型组相比,西药组血清TG、LDL水平降低(P<0.05),TC、LEP水平显著降低(P<0.01);电针组血清TG、TC及LEP水平均显著降低(P<0.01),血清LDL无统计学差异(P>0.05)。针药组血清TG、TC及LEP水平显著降低(P<0.01),LDL水平降低(P<0.05)。西药组、电针组和针药组血清TG、TC、LDL及LEP水平均无统计学差异(P>0.05)。(3)体质量:与模型组相比,西药组在第3周体质量降低(P<0.05);电针组每周体质量值及体质量增长趋势随治疗周数的变化无统计学差异(P>0.05);针药组第2、3、4周体质量均显著降低(P<0.01),体质量的增长趋势随治疗周数的增加而显著减缓(P<0.01),并较电针组有差异(P<0.05)。第二部分电针调节下丘脑代谢-生殖信号传导治疗PCOS合并IR机制研究(1)信号途径各物质基因与蛋白表达:与空白组相比,模型组LEP、POMC mRNA表达显著降低(P<0.01),Kiss-1、GnRH mRNA 表达显著升高(P<0.01),LEP、POMC蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05),KP蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组相比,西药组LEP、POMC mRNA表达显著升高(P<0.01),POMC蛋白表达升高(P<0.05),Kiss-1、GnRH mRNA,LEP、KP蛋白表达均无统计学差异(P>0.05);电针组LEP、POMC mRNA 表达显著升高(P<0.01),GnRH mRNA 表达降低(P<0.05),LEP、POMC蛋白表达升高(P<0.05),Kiss-1 mRNA及KP蛋白表达均无统计学差异(P>0.05);针药组LEP、POMC mRNA表达显著升高(P<0.01),Kiss-1、GnRH mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01);LEP、POMC 蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05),KP 蛋白表达显著下降(P<0.01),且针药组LEP、POMC蛋白表达均较西药组有统计学差异(P<0.05)。西药组、电针组和针药组LEP、POMC、Kiss-1和GnRH mRNA表达均无统计学差异(P>0.05);西药组和电针组、电针组和针药组LEP、POMC和KP蛋白表达均无统计学差异(P>0.05)。结论1.电针干预可以改善下丘脑瘦素--促阿片-黑素细胞皮质素原-Kisspeptin--促性腺激素释放激素(Leptin-POMC-Kisspeptin-GnRH)信号传导,可能是电针通过调节代谢,同时改善生殖内分泌,从而治疗PCOS合并IR的机制。2.电针可以改善上述代谢-生殖信号传导,更好地支持了“冲任”中医理论,体现了“冲任”所代表的生殖信号接受代谢信号的调节,及两者在中枢的传导作用。研究表明电针通过“调畅冲任”可以治疗PCOS合并IR。3.二甲双胍、电针及电针联合二甲双胍治疗均可调节PCOS合并IR模型大鼠生殖内分泌和糖脂代谢功能。电针联合二甲双胍调节除GnRH外的HPO轴下游部分更有效,可能更有助于促进卵泡发育和排卵;两者联合对降调外周糖代谢水平和体质量效果更优,可能对改善IR并调整高胰岛素水平引起的生殖内分泌紊乱有更好的效果。