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MicroRNA(miRNA)是一类长度约为21个核苷酸，主要在转录后水平调节基因表达的非编码RNA。在多种植物和动物中，miRNA已被报道可调控个体发育、肿瘤发生、应激反应等多种重要的生物学过程。在小鼠中，敲除负责miRNA成熟的关键基因Dicerl可导致卵巢、子宫等生殖器官发育异常和不育。但究竟哪些miRNA以及它们如何调控生殖器官的发育，尤其是原始卵泡形成，则尚无报道。为确定哪些miRNA参与原始卵泡形成的调控，我们利用miRNAmicroarray检测在原始卵泡形成前及形成时的小鼠卵巢中差异表达的miRNA，发现18条在原始卵泡形成过程中差异表达的miRNA。利用胎鼠卵巢体外培养结合脂质体转染等方法，我们建立了卵泡形成基因/miRNA功能筛选系统。通过miRNAmimics或inhibitors分别转染培养的胎鼠卵巢，我们对这18条miRNA在卵巢中进行超表达和功能抑制实验，发现其中5条miRNAmimics和6条inhibitors可显著影响原始卵泡的形成。为进一步了解这些miRNA如何调控原始卵泡的形成，我们开发了生殖系统专用的miRNA靶基因预测软件(SMESE)，并用于对上述功能miRNA的靶基因进行了预测，且通过实时定量PCR和荧光素酶报告系统对预测结果进行了验证。发现这些功能miRNA通过多种途径调节原始卵泡的形成，如miR-153通过抑制Caspase-2mRNA的翻译来减少卵母细胞的凋亡，从而促进原始卵泡的形成；miR-200a*通过抑制Cdh-2的mRNA和蛋白的表达调控卵巢细胞之间的粘附与通讯，进而抑制原始卵泡的形成。我们发现，miR-200a*不但调控Cdh-2的表达，其自身也受到雌激素的调控。利用条件性敲除小鼠模型，我们对卵巢体细胞和卵母细胞中的Cdh-2的功能进行了研究，结果发现卵巢体细胞缺失Cdh-2之后会抑制原始卯泡形成，而Cdh-2在卵母细胞中的缺失并没有影响原始卵泡的形成，表明雌激素通过卵巢体细胞中miR-200a*与其靶基因Cdh-2来抑制原始卵泡形成。我们的研究结果，不仅第一次系统地证明了miRNA可参与卵泡形成，也为卵泡形成的分子调控机制增添了新内容。