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胰岛再生源蛋白RegIIIγ(regenerating islet-derived protein,Reg)作为免疫、炎症调节因子,在炎症、肿瘤等多种疾病或受损组织中均有表达,主要发挥促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、防止伤口感染的功能。目前已知其与胰腺、胃肠道、肝脏等消化系统疾病密切相关,能够促进胰腺、肠道和皮肤等组织的损伤修复。本实验室前期工作发现RegIIIγ在肝病发生中可能参与肝组织损伤与修复,然而目前对其在肝脏再生中的受体及作用机制缺乏了解。为此,本课题拟探究RegⅢγ对大鼠肝细胞BRL-3A生长的作用及机制。本文通过慢病毒介导RegⅢγ转染至大鼠肝细胞BRL-3A中,得到RegⅢγ稳定过表达的BRL-3A细胞,并分别利用MTT法和EdU法检测RegⅢγ对BRL-3A细胞活性及增殖的影响,通过流式细胞术检测RegⅢγ对BRL-3A细胞周期及凋亡的作用。结果表明,过表达RegⅢγ后,BRL-3A细胞的生长活性显著增加,增殖细胞数目明显增多,细胞周期进程得到显著促进。但BRL-3A细胞凋亡没有受到明显的影响。为进一步探究RegⅢγ的受体及其对大鼠肝细胞BRL-3A的作用机理,本文利用IPA、GenMAPP、KEGG等数据库以及相关文献查阅构建了RegⅢγ的信号通路图,并通过Western Blot检测RegⅢγ下游通路蛋白的表达情况。结果发现,p-STAT3,p-PKC,以及细胞增殖相关蛋白CCNA2、CCND1和c-MYC均显著表达上调,MAP3K12、p-JNK、P38MAPK、MEK1、p-ERK1/2等MAPK信号通路相关蛋白以及NF-κB(p-p65)的表达均没有显著变化。瞬时转染pcDNA3.1(-)-RegⅢγ重组质粒至BRL-3A细胞后的免疫荧光结果表明,RegⅢγ经历了从胞质中入核然后出核并定位于核膜周围及细胞质中的过程。进一步通过免疫共沉淀法检测RegⅢγ的作用受体,发现RegⅢγ能够与EGFR、EXTL3相互作用,并且在转染后的不同时间点分别与EGFR、EXTL3在BRL-3A细胞中存在共定位。因此,RegⅢγ可能通过与EGFR、EXTL3相互作用激活JAK-STAT、PKC等信号通路,进而调控细胞增殖相关蛋白的表达,促进大鼠肝细胞BRL-3A的增殖。