柑橘果实富含类胡萝卜素、类黄酮、维生素C和柠檬苦素类等多种功能性物质,对人体健康非常有益。长久以来,有部分人群摄入一定量的温州蜜柑等果实(剂量依赖型,有些人只食用一个果实)会诱发他们产生不适症状,主要包括牙龈肿胀,咽喉干、疼痛,嘴唇干裂,口腔溃疡,呕吐和腹泻等,我国民间俗称为“上火”。温州蜜柑引起人体产生的食物不良反应,本文统称为温州蜜柑诱导的综合症(Satsuma-inducedsyndrome,SIS)。迄今为止,有关SIS致病机理的研究很少。本文通过招募志愿者,连续3年进行了志愿者温州蜜柑激发实验,设计了SIS的评分系统,对SIS的症状进行了统计和分析,并结合免疫学手段和血清蛋白组学技术对SIS进行了相关研究。同时也对实验室以前获得的温州蜜柑关键促炎基因CitSH1及其启动子进行了初步研究,开发出了柑橘促炎相关分子标记,能有效区分促炎柑橘品种和非促炎柑橘品种,可用于柑橘品种选育与改良。本论文的主要创新包括以下几点:(1)建立了SIS的评分系统,用于SIS症状的统计和分析;(2)首次开展了温州蜜柑激发实验,系统分析了志愿者SIS症状,研究初步显示SIS是一种免疫炎症反应;(3)基于CitSH1奶启动子序列差异,开发出了柑橘促炎相关分子标记,可用于分子标记辅助育种。主要内容和结果如下:1.温州蜜柑诱导人体免疫炎症反应:一项基于双盲的口腔食物激发试验研究1)连续3年进行温州蜜柑激发实验。以温州蜜柑(CitrusunshiuMarc)作为实验材料,甜橙(CitrussinensisOsbeck)被选为安慰剂作为对照。2009、2010年实验是以开放形式进行的,2011年志愿者进行了双盲实验。设计了一个标准问卷评分系统用来对志愿者的SIS症状进行评价。根据该标准,如果志愿者总得分≥3,则为SIS患者。过量食用温州蜜柑后(男生每次1.5kg,女生每次1kg),SIS志愿者比例约为70%,并且该比例在不同年份中可以重复。2)在SIS人群中,血液中的嗜酸性粒细胞和血小板显著性上升,嗜碱性粒细胞和血红蛋白显著性下降。总IgE和IgG水平在SIS人群过量食用温州蜜柑前后没有显著性差异。说明SIS与IgE介导的食物过敏反应不同。这些研究初步表明,SIS是一种外源物质刺激引起的免疫炎症反应(immuneinflammatoryresponse)。2.温州蜜柑诱导人体炎症反应血清蛋白标志物的筛选与验证1)在2010年参与的40名志愿者中,其中15名志愿者总得分≥6属于严重SIS患者,将其血液分为食用温州蜜柑前(beforeSatsumachallenge,Pre-SC)和食用温州蜜柑后(afterSatsumachallenge,Post-SC)两组。利用双向电泳及质谱技术对Pre-SC和Post-SC两组血清总蛋白进行分析,结果显示有10个蛋白具有显著性差异(P