广谱抗生素引起血液病患者腹泻后肠道菌群的定量分析

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目的:1对抗生素相关腹泻(Antibiotic associated diarrhea,AAD)前后菌群进行定量分析,全面、具体分析可能引起AAD的菌群。2了解AAD患者艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)的定植率变化及其危险因素。方法:1样品来源收集2018年11月至2019年10月于承德医学院附属医院血液内科就诊的明确诊断为血液病患者的新鲜粪便,粪便置于无菌容器内,通过承德医学院附属医院的电子病例系统完善患者的临床资料,包括住院号、年龄、性别、住院时间、抗生素及化疗药物的使用情况等。通过对同一患者未应用抗生素和发生AAD时的肠道菌群进行对比分析,明确不同抗生素引起腹泻时肠道菌群变化情况。2实验方法2.1采用Illumina测序技术的16S扩增子测序方法对β-内酰胺类抗生素组、β-内酰胺+其他类抗生素(其它类抗生素包括抗真菌类和糖肽类抗生素)粪便标本菌群结构进行全面分析。2.2采用实时定量聚合酶链反应法(Real Time-q PCR)对入组患者未应用抗生素和发生AAD时粪便进行CD毒素B(Toxin B,Tcd B)的检测。结果:一未应用抗生素时的血液病患者化疗后肠道菌群以厚壁菌门和变形菌门为主,拟杆菌门和放线菌门数量次之,在属水平上以埃希志贺菌属、肠球菌属、拟杆菌属、双歧杆菌属、乳酸杆菌属、链球菌属、Subdoligranulum、粪杆菌属等;拟杆菌门在β-内酰胺类抗生素组别腹泻时较未应用抗生素时显著减少,而β-内酰胺+其他类抗生素组别中拟杆菌门虽减少却未发现显著性差异;厚壁菌门未发现显著性差异,隶属于其肠球菌科及肠球菌属在β-内酰胺类组和β-内酰胺+其他类抗生素组中均显著减少,以β-内酰胺+其他类抗生素组为著;变形菌门在两组别为第二优势菌,抗生素使用后未发现显著差异,但隶属于其的埃希志贺菌显著升高;双歧杆菌属在β-内酰胺类组和β-内酰胺+其他类抗生素组均显著升高;Alpha多样性提示应用β-内酰胺类抗生素、β-内酰胺联合其他类抗生素患者发生抗生素相关腹泻时较未应用抗生素时肠道菌群丰度及多样性均降低。PCA图分析可知,β-内酰胺类抗生素组、β-内酰胺联合其他类抗生素组患者抗生素相关腹泻时与未应用抗生素时比较可见肠道菌群整体结构相差较大。二|血液科AAD患者CD定植率升高;粒细胞缺乏是艰难梭菌相关性腹泻(Clostridium difficile associated diarrhea,CDAD)的危险因素(P=0.018),性别、年龄、住院时长、近两个月住院、糖尿病、高血压、化疗、抗生素种类等均与CDAD无显著相关性(P>0.05)。结论:1 AAD与肠道细菌菌群多样性及丰度有关,可减少其细菌菌群多样性及丰度;广谱抗生素的应用可诱导变形菌门丰度升高,以埃希志贺菌属为著。2血液科患者发生AAD时艰难梭菌定植率升高,粒细胞缺乏是CDAD的危险因素。
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