巴旦木细菌性穿孔病病原及其生物学特性研究和室内药剂筛选

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巴旦木细菌性穿孔病是在2020年新疆喀什地区莎车县发现的一种严重的病害,该病害主要危害植株的叶片和果实,病害发生时,在叶片表面形成近圆形或不规则病斑,之后造成整株树的叶片脱落,严重影响的植株的光合作用,导致当地巴旦木种植区的产量下滑,严重影响了当地农民的收入,为了弄清该病的病原菌,本人针对其病原进行准确的鉴定,以及对其生物学特性和防控药剂筛选的研究,作出以下几点结论,具体研究结论如下:(1)采用细菌组织常规分离技术从发病的植株叶片和果实上分离、纯化病原菌,获取疑似病原菌的3个代表菌株接种到新鲜健康的果实和叶片上,经过3-5 d后,健康的叶片和果实,均能产生与田间相同的症状,接种为无菌水的果实和叶片均无产生病斑,证明其接种菌株为致病菌株。为进一步归纳其分类单元,采用细菌形态学特征和常规生理生化鉴定,研究表明将纯化3-4次后的菌株在NA培养基上观察培养12 h为乳白色,培养24 h逐渐为淡黄色,近圆形,表面光滑易挑起、饱满、不透明、粘稠、菌落直径为0.80-2.00 mm。生理生化结果表明,供试菌株接触酶反应、氧化酶反应、H2S反应呈阳性,可以使明胶液化,但不能使淀粉水解。靛基质反应、VP反应(二乙酰试验)、吐温80、甲基红反应呈阴性,不能还原硝酸盐。参照细菌鉴定手册,该菌株形态学特征,生理生化特性均与假单胞菌(Pseudomonas sp)一致。通过PCR技术扩增16S r DNA、rpo D、gry B的部分序列,经过分子生物学鉴定,通过与基因文库进行比对,建立相关菌株系统发育树,结果表明该病原菌为假单胞菌(Pseudomonas sp)。(2)通过对巴旦木细菌性穿孔病新的病原菌进行生物学特性初步研究,结果表明:巴旦木细菌性穿孔病的病原菌在不同的温度、p H、氯化钠浓度、培养基和碳氮源等生长条件下的生长情况都有着明显的差异。LB培养基为最适合其生长的培养基,28℃为最适合其生长的温度,p H为7.5时最适合其生长,最适氯化钠浓度为1%,致死温度为50℃。在以甘露醇为碳源时生长量最好,在不同的氮源中,病原菌对酵母膏利用最好,在氯化铵作为氮源时,不利于病原菌生长。(3)为了对病害进行更好地防控,防止病原菌进一步危害植株,通过查阅相关文献筛选出高效低毒常用的12种杀菌剂进行室内毒力测定,研究结果表明:12种供试药剂,在一定浓度范围内均具有一定的抑菌效果,但不同药剂和同种药剂的不同浓度下的抑菌效果都存在差异,0.3%四霉素的毒力最强,EC50为2.92 mg/L,其次是12%中生菌素可湿性粉剂、3%噻霉酮水分散粒剂、53.8%氢氧化铜水分散粒剂对病原菌的防治较好,EC50值分别为6.47 mg/L、20.24 mg/L、50.94 mg/L。其中30%噻唑锌悬浮剂、80%波尔多液可湿性粉剂对病原菌的毒力最差,EC50都在10000 mg/L之上。
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