【摘 要】
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目的:本研究旨在筛选非节段型白癜风（non-segmental vitiligo,NSV）患者血浆外泌体中差异表达microRNA,探寻其参与NSV发病的可能机制,为开发潜在诊断生物标记物和治疗药物奠定实验基础。方法:本研究首先通过高通量测序技术对NSV患者及健康对照组血浆外泌体microRNA进行测序分析,采用生物信息学方法进行初步筛选后再应用实时定量聚合酶链式反应（quantitative r
【基金项目】
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国家自然科学基金项目的资助（No.81773306）；
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目的:本研究旨在筛选非节段型白癜风（non-segmental vitiligo,NSV）患者血浆外泌体中差异表达microRNA,探寻其参与NSV发病的可能机制,为开发潜在诊断生物标记物和治疗药物奠定实验基础。方法:本研究首先通过高通量测序技术对NSV患者及健康对照组血浆外泌体microRNA进行测序分析,采用生物信息学方法进行初步筛选后再应用实时定量聚合酶链式反应（quantitative real time polymerase chain reaction,q RT-PCR）验证差异表达microRNA,进一步进行临床特征相关性分析。采用免疫荧光和q RT-PCR验证自然杀伤细胞内化血浆外泌体的情况。最后,通过Western blot、q RT-PCR、细胞计数试剂盒检测、流式细胞术、酶联免疫吸附测定、双荧光素酶报告基因等方法探讨了miR-1469对自然杀伤细胞的作用及其机制。结果:本研究采用高通量测序技术测定了NSV患者及健康对照组血浆外泌体microRNA的表达谱,生物信息学方法筛选出miR-3677-3p、miR-1469、miR-4437为候选microRNA。进一步通过q RT-PCR验证发现miR-1469表达显著升高,且miR-1469表达水平与患者白癜风疾病活动度评分呈正相关。利用免疫荧光和q RT-PCR验证了自然杀伤细胞摄取NSV患者血浆外泌体后胞内miR-1469表达水平升高。体外细胞学实验结果表明上调miR-1469可导致自然杀伤细胞增殖活力下降,干扰素-γ分泌减少。双荧光素酶报告基因验证miR-1469能结合于所预测靶标CD122 m RNA的3’非翻译区,且上调miR-1469后自然杀伤细胞内CD122的蛋白表达水平下降。进一步实验发现过表达CD122可部分逆转miR-1469对自然杀伤细胞的生物学效应。结论:NSV患者血浆外泌体miR-1469通过靶向抑制CD122的蛋白表达,抑制自然杀伤细胞增殖活力与干扰素-γ分泌能力,可能在一定程度上保护黑素细胞。miR-1469有望成为NSV疾病活动生物标记物和针对固有免疫的治疗新靶点。
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