缺血后适应干预大鼠脊髓再灌注损伤时对CaSR和Caspase-12的影响

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目的:验证缺血后适应(Ischemic post-conditioning,IPC)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤(Spinal cord ischemia reperfusion injury,SCIRI)的保护作用并检测其对钙敏感受体(Calcium-sensing receptor,CaSR)及内质网应激相关标志物Caspase-12表达的影响。方法:五十只SD大鼠被完全随机化等分为5个组(为充分避免因不同动物个体之间的差异而产生随机误差):假手术组(Sham组),缺血再灌注模型组(IR组),IR模型+缺血后适应组(IPC组),IPC组+激动剂(IPC-GdCl3组)和IR模型+抑制剂组(NPS2390组)。Sham组在手术中只需显露大鼠腹主动脉的一段而不用动脉夹阻断血流,其余各组阻断腹主动脉25分钟左右后再松开,构建脊髓IR模型;IPC组于恢复血流3-4分钟后给予三个周期的缺血后适应操作;IPC-GdCl3组在连续2天尾静脉注射CaSR激动剂GdCl3后行IPC组操作;对于NPS2390组我们采取的干预方法是提前2天,每天通过尾静脉注射一定量的NPS2390,随后建立IR模型。通过3B评分法对大鼠后肢运动功能进行评价来推测脊髓再灌注损伤的程度区别,我们选用TUNEL法检测脊髓组织中细胞凋亡数目并通过蛋白质免疫印迹技术及免疫组织化学定量检测CaSR及Caspase-12表达后记录数据予以分析。结果:1.除Sham组以外其余4组大鼠3B评分均少于Sham组(P<0.05),对于IPC组及NPS2390组,分数则分别多于IR组和IPC-GdCl3组(P<0.05)。2.TUNEL法阅片记录显示,假手术组仅能看到零星的阳性反应;IR组和IPC-GdCl3组阳性细胞数目多于IPC组及NPS2390组(P<0.05)。3.蛋白免疫印迹检测结果可见,建模各组CaSR及Caspase-12蛋白印迹表达量显著高于假手术组(P<0.05);IR组及IPC-GdCl3组的CaSR及Caspase-12表达量分别高于IPC组及NPS2390组(P<0.05)。4.免疫组织化学结果可见,除Sham组以外的其余建模各组CaSR及Caspase-12蛋白表达高于假手术组(P<0.05);IR组及IPC-GdCl3组的CaSR及Caspase-12表达量分别高于IPC组及NPS2390组(P<0.05)。结论:1.缺血后适应能够对大鼠脊髓缺血再灌注损伤起到一定程度的恢复作用并改善相关功能损害;2.缺血后适应在保护过程中可抑制脊髓组织中CaSR及Caspase-12的表达。
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