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酿酒酵母因其具有优良的生长和发酵性能,而被广泛应用于乙醇和食品工业。在发酵过程中,有很多不可避免的胁迫环境出现,如高温、高渗等,这些环境会抑制细胞生长、降低细胞发酵能力,给相关发酵行业带来一定的经济损失。所以构建具有良好耐受性的酵母菌种在工业应用方面具有重要的意义。CYR1基因编码的腺苷酸环化酶是Ras-cAMP信号通路的关键酶,Ras-cAMP信号通路在调节酵母细胞压力抗性中起着重要的作用。所以本研究从改变CYR1(腺苷酸环化酶编码基因)启动子的长度来实现微调控CYR1基因的表达水平,达到使酵母细胞具有良好耐受性的同时能够正常发酵的目的。主要研究内容及结果如下:(1)以整合型质粒YIplac211为载体,构建一系列CYR1基因启动子的3’端序列部分缺失的的重组质粒,缺失梯度为30 bp。以URA3基因作为筛选标记,利用重组质粒通过两步重组法实现酿酒酵母菌株AY15a的CYR1基因启动子3’端序列的部分缺失,并且无任何外源基因残留。CYR1基因启动子3’端部分缺失突变株AY15a-30、AY15a-60、AY15a-90、AY15a-120 和 AY15a-150的CYR1基因的 mRNA水平分别是亲本菌株AY15a的89.1%,76.8%,60.1%,56.7%和41.3%。耐受性实验结果显示:CYR1基因启动子的3’端缺失90 bp和120 bp的菌株AY15a-90和AY15a-120具有耐热性能,对8%(v/v)的乙醇也具有一定的耐受性。玉米原料浓醪发酵结果显示:突变株AY15a-90和AY15a-120的30℃发酵性能和亲本菌株AY15a类似;当发酵温度升高为40℃时,AY15a-90和AY15a-120的发酵性能相对亲本菌株有明显的提高,AY15a-90和AY15a-120的乙醇产量相对亲本菌株AY15a分别提高了 14.0%和14.6%。(2)以URA3基因作为筛选标记,利用重组质粒通过两步重组法实现面包酵母BY-14α的CYR1基因启动子3’端序列缺失90 bp和120 bp,获得面包酵母突变株BY-14α-90 和 BY-14α-120。BY-14α-90 和 BY-14α-120 的 CYR1基因的 mRNA水平分别是亲本菌株BY-14α的43.1%和20.3%。对面包酵母突变株的发酵性能、冷冻存活率、生物量进行测定,发现突变株BY-14α-90和BY-14α-120的冷冻存活率相对亲本菌株分别提高了 71.8%和97.0%,但是突变株的发酵性能及生物量略有下降,可能是CYR1基因的转录水平太低,影响到了细胞的正常生长代谢。