论文部分内容阅读
目的：从Thl7/Treg亚群失衡角度，探讨DVT发病过程中免疫学发病机制，阐释中药单体绿原酸逆转Thl7/Treg亚群失衡治疗DVT的作用与关键分子机制，为临床治疗提供实验依据。 方法：根据Reyers法建立大鼠DVT模型，于造模术后第1d分别给予绿原酸40、20、10 mg/kg及等量生理盐水灌胃，并设立假手术组及正常对照组。于造模后第3d、7d，流式细胞术检测各组大鼠脾脏Th17亚群、Treg亚群比例，ELISA法检测大鼠外周血IL-17、TGF-β、D-二聚体蛋白水平，RT-PCR法分析IL-17 mRNA、TGF-βmRNA转录水平。检测大鼠DVT模型静脉血栓干、湿重。分析DVT大鼠模型Th17/Treg比值、IL-17、TGF-β与血栓干、湿重及D-二聚体水平的相关性。 结果： 1.造模后第3d大鼠DVT模型中存在Th17亚群比例升高，Treg亚群比例降低， Th17/Treg比值升高。绿原酸治疗后，DVT大鼠Th17亚群比例降低，Treg亚群比例升高，Th17/Treg比值降低；绿原酸对DVT大鼠Th17/Treg调节的作用呈显著剂量依赖性，随着剂量增大，效果增加（P<0.05）。绿原酸大剂量组IL-17蛋白水平低于绿原酸中剂量、绿原酸小剂量组，有显著性差异（P<0.05），TGF-β蛋白水平高于绿原酸中剂量、绿原酸小剂量组，有显著性差异（P<0.05）。绿原酸大剂量、绿原酸中剂量组 IL-17 mRNA水平低于绿原酸小剂量组， TGF-β mRNA水平高于绿原酸小剂量组，有显著性差异（P<0.05），绿原酸大剂量组与绿原酸中剂量组比较，差异无显著性（P＞0.05）。绿原酸大剂量组D-二聚体水平低于绿原酸中剂量、绿原酸小剂量组，有显著性差异（P<0.05），绿原酸中剂量组与绿原酸小剂量组比较，差异无显著性（P＞0.05）。绿原酸大剂量、绿原酸中剂量组血栓干、湿重均低于绿原酸小剂量、生理盐水组，有显著性差异（P<0.05），绿原酸大剂量组与绿原酸中剂量组比较，有显著性差异（P<0.05）。 2.造模后第7d绿原酸大剂量组Th17亚群比例低于绿原酸中剂量、绿原酸小剂量组，有显著性差异（P<0.05）；绿原酸中剂量组与绿原酸小剂量组比较，有显著性差异（P<0.05）。绿原酸大剂量组Treg亚群比例高于绿原酸中剂量组，绿原酸中剂量组高于绿原酸小剂量组，均有显著性差异（P<0.05）。绿原酸大剂量组Th17/Treg与绿原酸中剂量组比较，绿原酸中剂量组与绿原酸小剂量组比较，绿原酸小剂量组与生理盐水组比较，有显著性差异（P<0.05）。绿原酸大剂量、绿原酸中剂量组IL-17水平低于绿原酸小剂量组，TGF-β蛋白水平高于绿原酸小剂量组，有显著性差异（P<0.05），绿原酸大剂量组与绿原酸中剂量组比较，有显著性差异（P<0.05）。绿原酸大剂量、绿原酸中剂量组IL-17 mRNA水平低于绿原酸小剂量组，TGF-βmRNA水平高于绿原酸小剂量组，有显著性差异（P<0.05），绿原酸大剂量组与绿原酸中剂量组比较，有显著性差异（P<0.05）。绿原酸大剂量组D-二聚体水平低于绿原酸中剂量、绿原酸小剂量组，有显著性差异（P<0.05），绿原酸中剂量组与绿原酸小剂量组比较，差异无显著性（P>0.05）。绿原酸大剂量组血栓干、湿重低于绿原酸中剂量组，绿原酸中剂量组低于绿原酸小剂量组，均有显著性差异（P<0.05）。相关性分析：Th17/Treg与血栓湿重、干重及D-二聚体水平呈正相关（r=0.5927，0.5160，0.4205，P<0.01）；IL-17与血栓湿重、干重及D-二聚体水平呈正相关（r=0.5716，0.6124，0.3412，P<0.01）；TGF-β与血栓湿重、干重及 D-二聚体水平呈负相关（r=-0.4785，-0.4650，-0.2617，P<0.01）。 结论：DVT大鼠存在Th17/Treg亚群偏移现象，Th17亚群明显升高，Treg亚群明显降低。绿原酸干预后，Th17/Treg偏移现象明显逆转，绿原酸对DVT大鼠Th17/Treg亚群失衡具有调节作用，优势诱导Th17/Treg向Treg亚群偏移，降低D-二聚体水平，减轻血栓干、湿重，进而治疗DVT。