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研究目的:子痫前期(Preeclampsia,PE)是最为重要的妊娠期心血管风险不良暴露,具有内皮功能异常、氧化应激、炎症等与心血管疾病共同的病生理机制,应进行一体化防控。子痫前期的早期筛查和干预应该作为心血管病早期预防的开端。Elabela作为APJ受体的一种新发现的内源性配体,对胚胎发育、胎盘发育、促进血管生成、抑制肾重塑、抑制纤维化和调节体液平衡等方面有着积极的作用,近年来越来越多的动物实验显示Elabela可以促进胎盘中滋养层细胞的迁移和侵袭能力,进而有利于螺旋动脉重塑,此外还可能起到舒张血管、调节血压的作用。目前针对Elabela作用于胎盘发育和PE发生的研究甚少,它在人类妊娠及PE发生发展中的作用有待进一步探讨。因此,本实验首先观察人类胎盘中Elabela的表达情况,然后用Elabela蛋白对人绒毛膜滋养层细胞进行干预,探讨其对人类胎盘滋养层细胞功能的影响及其潜在血压调控机制,探索Elabela在PE防治上的潜在应用价值。研究内容与方法:⑴收集2016年12月至2018年4月间在中国人民武装警察部队特色医学中心产科分娩的子痫前期孕妇34例作为观察组,同期收集正常孕妇40例作为对照组,运用RT-PCR技术检测胎盘中Elabela、APJ受体及ERK1/2的相对基因表达水平,应用免疫组化方法检测Elabela和APJ受体的蛋白水平及其在胎盘结构中的具体表达部位,通过Western blot技术检测胎盘中ERK1/2磷酸化活化水平,最后通过Pearson相关分析将Elabela表达水平、APJ受体表达水平及ERK1/2磷酸化活化水平同孕妇的血压水平进行相关分析。⑵用正常孕妇和PE孕妇的血清来培养人绒毛膜滋养层细胞,常规胎牛血清作为空白对照,再添加Elabela蛋白进行干预,梯度药物浓度干预实验找出Elabela蛋白对人绒毛膜滋养层细胞的最佳药物浓度,运用CCK-8技术检测各组细胞的增殖情况,通过Transwell技术检测各组细胞的侵袭能力变化情况,最后应用Western blot技术检测各组中ERK1/2活化水平的改变情况。研究结果:⑴基线资料上对照组与子痫前组在年龄和入院分孕龄上的差异没有统计学差异(P﹥0.05);子痫前组的入院收缩压、舒张压、心率、BMI、孕期增加体重、S/D、PI、RI均高与对照组(P﹤0.05)。RT-PCR结果显示相比于对照组,Elabela和APJ受体基因的相对表达水平均降低,差异具有统计学意义(P﹤0.05);ERK1/2的基因表达在对照组和子痫前期组之间没有明显的统计学意义(P﹥0.05)。免疫组化结果显示Elabela和APJ受体在胎盘中的表达部位基本一致,主要表达于绒毛滋养层细胞与蜕膜细胞中,散在表达于血管内皮细胞中,主要表达部位是细胞浆和细胞膜;此外在表达强度上,相比于对照组,Elabela和APJ受体在子痫前期组中表达均是降低的(分别为12.13±1.93比15.95±2.08,P=0.002;9.22±1.56比14.57±4.167,P=0.009)。Western blot结果显示ERK1/2总蛋白与PERK1/2的分子质量是42/44KD,β-actin的分子质量是42KD;对照组与子痫前期组在ERK1/2总蛋白的表达差异上无统计学意义(1.18±0.18比0.85±0.10,P=0.09),而相比于比对照组,子痫前期组中ERK1/2活化水平升高(1.10±0.17比0.47±0.11,P=0.03)。Pearson相关分析结果显示,Elabela与收缩压存在负相关(r=﹣0.46,P=0.01),与舒张压存在负相关(r=﹣0.44,P=0.01);APJ受体与收缩压存在负相关(r=﹣0.47,P=0.006),与舒张压存在负相关(r=﹣0.45,P=0.01);ERK1/2活化水平与收缩压存在正相关(r=0.45,P=0.04),与舒张压没有相关性(r=0.31,P=0.17)。⑵梯度药物浓度实验结果显示当Elabela药物浓度为1ug/ml时,CCK-8干预2小时和4小时后所检测到的OD值最大,所以1ug/ml是Elabela作用于HTR-8/SVneo细胞系的最佳浓度。CCK-8结果显示各加药组比非加药组的OD值均明显升高(FBS+Ela组vs FBS组、N+Ela组vs N组、PE+Ela组vsPE组,P<0.05);在非加药组中,FBS组的OD值高于N组和PE(P<0.05),其中N组的OD值高于PE组(P<0.05);在各加药组中,FBS组的OD值也高于N组和PE(P<0.05),其中N组的OD值也高于PE组(P<0.05)。Transwell结果显示FBS+Ela组比FBS组的细胞数明显增多(10.61±3.62比5.41±0.62,P<0.05),N+Ela组比N组的细胞数明显增多(11.34±3.82比6.34±0.73,P<0.05),PE+Ela组比PE组的细胞数也明显增多(11.93+3.09比5.77±0.47,P<0.05)。Western blot结果显示TERK1/2、P-ERK1/2、β-actin的分子质量分别是42/44KD、42/44KD、42KD;各加药组与对应的非加药组相比,ERK1/2总蛋白水平之间的差异没有统计学意义(P﹥0.05),分别是FBS+Ela组(1.06±0.11)vs FBS组(0.92±0.15)、N+Ela组(0.97±0.63)vs N组(1.01±0.12)、PE+Ela组(0.55±0.22)vsPE组(0.78±0.16);而相比于非加药组,各对应加药组的ERK1/2活化水平明显降低(P<0.05),分别是FBS组(1.82±0.23)vs FBS+Ela组(1.19±0.15)、N组(0.91±0.11)vs N+Ela组(037±0.11)、PE组(1.76±0.47)vs PE+Ela组(0.97±0.13)。研究结论:Elabela/APJ途径在人类妊娠中可能发挥着重要的作用,不仅可以加强胎盘滋养层细胞的增殖、侵袭以及随后的子宫螺旋动脉重塑,还可能通过抑制ERK1/2的活化水平起到舒张血管、降低血压的作用,提示Elabela可能会为子痫前期的防治和心血管疾病初始预防提供一个新的思路。