治疗肺动脉高压的携hVEGF165表达载体阳离子脂质微泡的制备

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Neldaking
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[目 的]制备两种MBs(普通脂质MBs、阳离子脂质MBs),检测其理化特性;制备两种携带hVEGF165表达载体脂质微泡,检测其基因质粒携带率,评估两种载体携带基因质粒的能力。[方 法]采用薄膜水化法和机械振荡法制备两种不同MBs,通过在成脂膜的材料中加入DC-chol作为MBs表面上的阳离子,使载体表面携带正电荷来制备阳离子脂质MBs。离心静置后,光镜下观察两种微泡的形态,大小,分布,浓度。检测两种微泡平均粒径、表面电位和浓度,两种微泡与hVEGF165表达载体通过孵育静电吸附法连接,检测其基因质粒连接率。[结 果]自制造影剂肉眼观察呈浑浊的乳白色液体,静置一段时间后有分层现象;光学显微镜观察,可见大量微泡,呈球形,大小均一,形态规则,分散度较好;透射电子显微镜观察,可见外层薄膜及内层的全氟丙烷气体;制备两种MBs1h,马尔文纳米粒度电位分析仪检测平均粒径及表面电位,检查结果:普通脂质MBs:平均粒径1.40±0.28um,表面电荷-2.41 ±0.51mV,血球计数板计算平均浓度3.32±0.34x108个/ml。阳离子脂质MBs:平均粒径1.31±0.23um,表面电荷28.00±1.84mV,平均浓度3.17±0.16x108个/ml。通过孵育静电吸附法制备出连VEGF基因质粒的两种MBs,计算基因质粒连接率,比较两种MBs携带基因质粒的能力,阳离子脂质MBs携带hVEGF165表达载体携带率显著高于普通脂质MBs,阳离子脂质MBs携带基因的能力高于普通脂质MBs。[结 论]自制脂质MBs,可根据需要改变MBs的制备条件,灵活制备不同平均粒径、表面电荷及浓度的脂质MBs,阳离子脂质MBs携带hVEGF165表达载体携带率较高,携带基因质粒能力较强,可作为载基因体内转染的良好载体。
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