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研究目的:在BALB/c乳腺癌小鼠移植瘤(4T1乳腺癌细胞)的动物模型中,研究达沙替尼与DC疫苗是否具有协同抗肿瘤疗效。一方面DC疫苗能够直接激活机体免疫效应细胞,以增强其抑制肿瘤增殖和转移的目的;另一方面达沙替尼间接通过增加肿瘤微环境中T细胞的募集抑制肿瘤细胞的增殖和转移。本研究可为今后达沙替尼和DC疫苗在乳腺癌的临床治疗方面提供实验基础。研究方法:1.从小鼠双后肢骨髓中获得DC前体细胞,在细胞因子GM-CSF和IL-4联合作用下,大量制备骨髓源性DC。使用4T1细胞裂解液负载修饰DC,制备4T1全抗原特异性DC疫苗,后使用LPS催熟DC。在倒置显微镜下对不同阶段DC进行形态学观察并拍照,最后经由流式细胞技术检测成熟DC胞膜上CD86、CD80、MHCII、CD11c的表达情况,以此检测DC成熟程度。2.寻找4T1细胞最适致瘤数量,利用最适数量建立小鼠晚期乳腺癌模型。寻找达沙替尼提高肿瘤微环境中CD8+T细胞浸润的最适剂量。手段包括瘤周注射DC疫苗疗法,达沙替尼连续灌胃疗法或联合两种疗法。接种4T1细胞34天后,评估不同治疗方案对4T1乳腺癌原位肿瘤体积大小、脏器(肺脏、肝脏)转移情况及荷瘤小鼠生存期的影响;采用免疫组织化学法及Tunel法比较不同治疗方案对原位肿瘤组织细胞中Ki-67、CD31、CD8、NKG2D及细胞凋亡的表达差异。综合以上各种检测的指标及结果评估达沙替尼和DC疫苗是否具有协同抗肿瘤的疗效,并探讨其可能的机制。研究结果:1.成熟的DC经流式细胞仪分析检测示:CD11c,CD86,MHCII、CD80表达率分别为:(92.3±1.2)%、(86.4%±2.3)、(87.1±1.8)%、(89.7±2.5)%。给予达沙替尼0mg/kg,5mg/kg,10mg/kg,15mg/kg,30mg/kg的小鼠经免疫组化方法检测CD8阳性表达率,结果示:(17.80±1.09)、(18.01±3.89)、(19.78±2.49)、(46.32±4.04)、(47.75±3.56)。2.达沙替尼组、DC疫苗组与对照组相比,肿瘤体积虽然减小,但均无统计学意义(P>0.05);双重治疗组与达沙替尼组、DC疫苗组或对照组相比,肿瘤体积显著减小,且差异具有统计学意义(P<0.05)。双重治疗组脾脏重量最轻,对照组脾脏重量最重,且具有统计学意义(P<0.05)。达沙替尼组、DC疫苗组及对照组相比,脾脏重量没明显差异,且无统计学意义(P>0.05)。3.DC疫苗组、达沙替尼组、双重治疗组与对照组相比,生存期有所延长,但均无统计学意义(P>0.05)。双重治疗组与其他三组任一相比,生存期无明显延长(P>0.05)。4.免疫组化示:双重治疗组与达沙替尼组、DC疫苗组或对照组相比能明显减低原位肿瘤组织细胞表达Ki-67和CD31(P<0.05)。DC疫苗组和达沙替尼组能减低Ki-67和CD31,但与对照组相比无统计学意义(P>0.05)。在原位肿瘤组织中,CD8、NKG2D阳性率在双重治疗组明显增高,尤其是以CD8增高为显著,与达沙替尼组、DC疫苗组或对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。5.小鼠肺脏转移性癌结节在解剖显微镜下计数并比较示:双重治疗组癌结节数目与达沙替尼组、DC疫苗组或对照组相比,肺转移性癌结节数目明显减少,且差异具有统计学意义(P<0.05)。Tunel法检测肿瘤细胞凋亡情况示,双重治疗组与其他三组任一相比,凋亡表达率明显增加(P<0.05)。DC疫苗组、达沙替尼组与对照组相比细胞凋亡表达率无统计学差异(P>0.05)。研究结论:达沙替尼和DC疫苗两者联合能显著增强荷瘤小鼠的机体免疫反应,延缓肿瘤的生长速度,促进肿瘤细胞凋亡并能减少肺转移癌结节的数目,但对荷瘤小鼠生存期的生存期无明显益处。本研究示达沙替尼和DC疫苗具有协同抗肿瘤效应,这种联合抗肿瘤效应可能是通过提高原位肿瘤微环境中免疫效应细胞(CD8+T细胞及NK细胞)数目所致。研究为今后达沙替尼和DC疫苗在晚期乳腺癌的临床治疗上提供了实验依据。