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幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H．pylori)是寄居在胃粘膜的一种非侵袭性的革兰氏阴性微需氧螺杆菌。H．pylori感染呈全球分布，感染率之高仅次于龋齿，居第二位。在感染者中，大约有15％～20％的人最终会导致严重的胃部疾病。现有的治疗H．pylori感染的方法存在很多弊端。近年来，人们逐渐认识到直接粘膜免疫能在粘膜表面产生保护性作用。通过口服疫苗直接刺激胃肠道粘膜免疫系统激发特异性免疫应答，使机体获得持久性的疾病防御能力。H．pylori疫苗免疫接种所诱导的免疫途径属于Th2型，通过增加IgG1、IL-4和IL-5的产生而阻止H．pylori在胃粘膜的生存，起免疫保护作用。生产口服疫苗是预防和治疗H．pylori感染所致上消化道疾病的有效途径。 国内外学者对H．pylori疫苗的研究做了大量的工作，有关研究人员已将H．pylori抗原基因转入细菌基因组中进行表达，经提纯制成口服疫苗。动物实验表明该疫苗有较好的免疫效果。但是该工作操作复杂、成本高，尤其是在提纯过程中保持抗原的活性是非常困难的。这不适合大规模生产H．pylori疫苗。利用植物作为生物反应器生产人类所需要的各种重组疫苗和药用蛋白是当今生物技术研究中的热点之一。通过直接食用转基因植物疫苗的方式代替传统的注射疫苗，无需昂贵的发酵、提取加工和冷藏等设备，可以节约大量的费用，易于普及推广，对于发展中国家尤其具有深远的意义。本课题首次获得了可食用的幽门螺杆菌HspA-UreB双价胡萝卜疫苗候选株系，这将有助于在全球范围内普及对H．pylori感染性疾病的预防与治疗。 1．幽门螺杆菌HspA基因的克隆及其在烟草中的表达。本研究根据在GenBank检索得到的幽门螺杆菌HspA序列设计引物，P1：GAATCCGACATATGAAGTTTCCATT和P2：GAGCTCGAGGTGTTTTTTGTGATCAT，利用PCR技术从幽门螺杆菌基因组DNA中克隆了HspA基因，将HspA基因重组到克隆载体pGEM-T easy中，质粒DNA测序，用DNAMAN软件将这段HspA序列与GenBank中所注册的DNA序列比较，同源性高达97％。将HspA基因重组到植物表达载体pBI121中。利用冻融法将pBI121-HspA质粒DNA转入农杆菌LBA4404，