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目的:对比观察Photofrin Ⅱ在同源食管上皮细胞系永生化细胞SHEE和恶性转化细胞SHEEC中吸收和排泄规律的差异,并观察放射和光动力两种处理因素以及两者联合对两种细胞抑制作用的差异,从而揭示排除了血管、免疫等复杂体内环境因素后,光动力杀伤肿瘤细胞的规律,并初步探索光动力与放射联合杀伤肿瘤细胞的效果,为食管癌的治疗提示新的途径。
方法:应用紫外分光光度仪测定各种细胞培养用液吸收光谱,确定630nm波长激光的透过率,从而决定靶细胞实际接受光照的能量;应用荧光分光光度仪对Photofrin Ⅱ进行荧光光谱分析,同时测定SHEE和SHEEC细胞在相同浓度和时间点对Photofrin Ⅱ的吸收和排泄情况;用CCK-8检测放射和光动力两种手段,以及两者联合应用对SHEE和SHEEC细胞的抑制作用。
结果:本实验所用的630nm波长的激光能完全透过M199培养液、M199完全培养液、PBS液;Photofrin Ⅱ激发波长在229nm、280nm、395nm等波长处,其中395nm波长光可激发Photofrin Ⅱ在634nm处发射荧光; Photofrin Ⅱ孵育150分钟后,SHEE和SHEEC细胞对其吸收达到高峰,随后进入平台期;SHEE和SHEEC细胞对Photofrin Ⅱ的吸收在一定浓度范围内随着孵育浓度的增加有所增加;Photofrin Ⅱ孵育150分钟后,更换为不含Photofrin Ⅱ的M199液,在换液15min内,SHEE和SHEEC细胞内Photofrin Ⅱ的含量变化较小,15min后迅速下降;在15μg/ml Photofrin Ⅱ浓度条件下,光动力对SHEE和SHEEC细胞的抑制作用随功率密度和照射时间的增大而增大,抑制率最高均能达到95%左右,且SHEE细胞的抑制作用明显高于SHEEC细胞;光动力和放射对SHEE和SHEEC细胞有明显抑制作用,200cGy放射后24h抑制率分别为17.42%,11.95%,有统计学差异(P<0.05);50mw/cm2功率密度下,光动力照射20Sec后24h抑制率分别为32.5%,19.18%,有统计学差异(P<0.05);放射前应用光动力两者抑制率显著增加,分别为33.46%,23.31%,与单纯放射和光动力处理组相比均有显著的统计学差异(P<0.05),放射后应用光动力较单纯光动力细胞抑制率无明显增加。
结论:SHEE和SHEEC细胞株对光敏剂Photofrin Ⅱ的吸收和排泄能力无明显差别,PDT在体体外对不同细胞的杀伤效应的差异可能与细胞对Photofrin Ⅱ吸收和排泄方面的因素无明显关系;PDT和放射联合应用对SHEE和SHEEC细胞的抑制作用比单纯应用两种手段增强,提示两种治疗手段联合应用可提高细胞抑制率,可能成为较为有效的治疗食管癌的联合治疗方案,具体联合方案有待于进一步临床研究。