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目的结合微流控与荧光定量RT-PCR技术建立发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)、裂谷热病毒(Rift Valley fever virus,RVFV)、哈特兰病毒(Heartland virus,HLV)、寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)、登革病毒(Dengue virus,DENV)、黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)、基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)、汉城病毒(Seoul virus,SEOV)、汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)、苏丹埃博拉病毒(Sudan Ebola virus,SEBOV)、扎伊尔埃博拉病毒(Zaire Ebola virus,ZEBOV)、马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)和拉沙病毒(Lassa virus,LASV)等常见出血热病毒的快速核酸检测方法,实现比传统的实时荧光定量RT-PCR检测方法更快的检测速度,为这13种病毒感染的快速诊断提供参考依据。方法以SFTSV、RVFV、HLV、HTNV、SEOV、ZEBOV、SEBOV和MARV的NP基因、ZIKV的NS1基因、DENV和YFV的NS5基因、CHIKV的E1基因以及LASV的GP基因作为靶序列设计特异性的引物探针;制备这13种病毒体外转录RNA参考品,并用其评价方法的灵敏性;用乙型脑炎等其他相关病毒核酸评价方法的特异性;利用RVFV、HLV、ZIKV、YFV、CHIKV、HTNV、SEOV、ZEBOV、SEBOV、MARV和LASV的假病毒或病毒培养物与健康人血清混合制备模拟阳性样本,用于检测方法的模拟临床验证,SFTSV和DENV检测方法采用临床病人标本进行验证,并与传统荧光定量RT-PCR检测方法进行比较。结果本研究成功建立了SFTSV、RVFV、HLV、ZIKV、DENV、YFV、CHIKV、HTNV、SEOV、ZEBOV、SEBOV、MARV和LASV微流控实时荧光定量RT-PCR检测方法;制备了13种病毒的体外转录RNA参考品,通过验证梯度稀释的RNA参考品,计算得到检测方法的最低检出限分别为61.4 copies/PCR、60.9 copies/PCR、156.9 copies/PCR、30.9 copies/PCR、226.2 copies/PCR、19.8 copies/PCR、535.6 copies/PCR、119.1 copies/PCR、123.6 copies/PCR、67.8 copies/PCR、12.8copies/PCR、61.2 copies/PCR、11.3 copies/PCR,除CHIKV最低检出限略高以外,其他各病毒检测方法均具有良好的灵敏性;13种病毒检测方法与其他病毒核酸均无交叉反应;利用病毒培养物或假病毒与健康人血清混合制备了RVFV、HLV、ZIKV、YFV、CHIKV、HTNV、SEOV、ZEBOV、SEBOV、MARV和LASV模拟临床样本,收集了DENV临床病人标本,利用除SFTSV以外的12种病毒微流控实时荧光定量RT-PCR检测方法对相应模拟样本或临床病人标本进行验证,模拟样本验证结果Ct值的变异系数均在2%左右,模拟样本验证及临床病人标本验证检出率与传统实时荧光定量RT-PCR检测方法一致,均为100%;此外,利用13种病毒微流控实时荧光定量RT-PCR检测方法对收集的健康人血清样本进行验证,经实时荧光定量RT-PCR检测方法验证结果一致,均为阴性。结论本研究建立的SFTSV、RVFV、HLV、ZIKV、DENV、YFV、CHIKV、HTNV、SEOV、ZEBOV、SEBOV、MARV和LASV微流控荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性、稳定性。除CHIKV最低检出限略高以外,其他各病毒检测方法均具有良好的灵敏性。除SFTSV还未验证样本以外其余病毒检测方法对模拟样本或临床样本的检测效果与传统的实时荧光定量RT-PCR检测方法一致。同时微流控检测方法能够以在25分钟以内完成一次检测,检测速度快于传统的实时荧光定量RT-PCR检测方法,可适用于现场实验室检测与早期诊断。