膳食结构中ω-6不饱和脂肪酸与ω-3不饱和脂肪酸的比例过高,尤其是ω-3不饱和脂肪酸的缺乏将导致许多现代流行病的发生。哺乳动物自身不能合成ω-3脂肪酸,只能长期从食物中摄取,而ω-3脂肪酸的来源十分有限,不足以满足人们的大量需求,因此急需寻找安全且丰富的不饱和脂肪酸来源。fat-1基因编码一种ω-3不饱和脂肪酸脱氢酶,能够将ω-6转化成ω-3多不饱和脂肪酸,提高食物中ω-3不饱和脂肪酸的含量,为改善人们的膳食结构提供新的途径。本试验克隆了牛β-乳球蛋白基因的两段5’调控序列,长1450bp的BLG1和长1575bp的BLG2。利用BLAST软件对测序结果进行同源性分析及计算机软件分析,表明BLG1和BLG2可以做为启动子调控序列构建乳腺特异性表达元件。以pCDNA3.1（+）为骨架载体,采用本实验室已有经密码子优化了的线虫基因sfat-1,构建sfat-1基因乳腺特异性表达载体pCB1F1E和pCB2F1E,长度分别为8976bp和9101bp。经内切酶NotⅠ酶切鉴定,pCB1F1E酶切后出现两条带,大片段长5329bp,小片段长3647bp。pCB2F1E酶切后大片段长5454bp,小片段长3647bp。两个对照组载体pCB1E、pCB2E,长度分别为7823bp和7948bp。经NotⅠ酶切检测,pCB1E酶切后大片段长4176bp,小片段长3647bp。pCB2E酶切后大片段长4301bp,小片段长3647bp。与正向连接设计结果均一致,表明四个载体构建正确。建立了中国荷斯坦奶牛8079胎儿成纤维细胞系,利用阳离子脂质体法,将上述四个载体对该细胞系进行转染,蓝色激发光下观察转染细胞发绿色荧光,经500μg/mL的G148抗性筛选,高压筛选14天后改用250μg/mL的G148维持培养,获得稳定表达的转基因阳性细胞株各1株。经PCR鉴定,证明sfat-1基因已整合进入细胞基因组内,表明该细胞可以作为供体细胞进行核移植。作为阶段性成果,本试验获得的转基因阳性细胞可以做为供体进行体细胞核移植,得到整合sfat-1基因的克隆胚胎,为研究转基因克隆牛奠定了基础。构建的对照载体可以做为乳腺通用表达载体,为实验室进一步利用体细胞核移植技术制作乳腺生物反应器做基础性工作。