研究背景：关节软骨无血液、淋巴供应，因此关节软骨的再生修复能力相当有限。目前在临床上应用的外科手术治疗方法在后期均存在一定问题，如纤维软骨形成、修复边缘区域整合性差等。近年来组织工程技术作为新的治疗手段正逐步兴起，为软骨损伤的治疗带来了希望。软骨组织工程三大关键问题，即种子细胞、生物支架、细胞因子微环境。自体软骨细胞是组织工程的首选种子细胞，临床应用最为广泛。但随着而来的难题是如何在体外短时间内获得足够数量、高质量的种子细胞，即扩增问题。微载体培养技术因其具有扩增种子细胞并维持细胞表型的特点而广泛用于动物细胞的大规模培养。微载体作为种子细胞的扩增载体，细胞可在微载体表面快速增殖，以满足后期检测分析或应用种子细胞的需求，特别是近年来以组织细胞外基质为原料制备的微载体。目前在皮肤、脂肪组织再生领域，组织细胞外基质源性微载体已获得良好结果，但在软骨组织再生领域未见相关报道。目的：本研究以天然软骨组织为基础，通过湿法粉碎、分筛过滤等处理后制备软骨细胞外基质源性微粒，并对其与软骨细胞复合后的生物相容性进行评估。研究内容主要包括：以天然软骨组织为材料制备关节软骨细胞外基质源性微粒，并观察其主要成分；观察其体外软骨细胞相容性；探究关节软骨细胞外基质源性微粒对兔软骨细胞表型的影响。方法：将猪关节软骨进行粉碎处理，通过分筛过滤得到直径220-300μm的软骨微粒，经脱细胞处理后获得天然去细胞关节软骨细胞外基质源性微粒，对此软骨微粒进行组织学成分鉴定、DNA残留量检测、GAG含量和总胶原含量检测。体外将软骨细胞与关节软骨细胞外基质源性微粒共培养，通过Dead/Live细胞活性染色和MTT，观察软骨细胞的生长、增殖情况。以普通平面静态培养和Cytodex-3微载体为对照，在三维微重力培养条件下，通过Rt-PCCR观察关节软骨细胞外基质源性微粒对软骨细胞表型的影响，通过流式细胞仪，检测软骨细胞周期变化。结果：扫描电镜显示关节软骨细胞外基质源性微粒表面有纳米级别绒毛附着；组织学染色显示关节软骨细胞外基质源性微粒无细胞残留，蕃红花“O”、甲苯胺蓝染色、II型胶原免疫组化染色阳性；总胶原、GAG定量检测结果显示该软骨微粒保留了软骨组织的大部分细胞外基质成分。Dead/Live细胞活性染色显示关节软骨源性微粒表面的软骨细胞成绿色，细胞形态呈短梭形或多角形；细胞数量逐渐增多，未见红色细胞存在；MTT结果显示关节软骨细胞外基质源性微粒组的OD值呈持续上升趋势。Rt-PCR结果显示关节软骨细胞外基质源性微粒能够促进软骨细胞Collagen-II、SOX-9、Aggrecan基因表达水平，抑制Collagen-II基因表达水平；细胞周期检测结果显示关节软骨细胞外基质源性微粒使多数细胞处于S、G2-M期。结论：以天然软骨组织为材料制备的关节软骨细胞外基质源性微粒，脱细胞处理彻底，软骨微粒呈类圆形结构，表面附有绒毛状微丝结构，保留了软骨组织的大部分细胞外基质成分；无细胞毒性，生物相容性良好，能够促进细胞增殖，是软骨组织工程种子细胞的优良扩增载体；刺激细胞生长、增殖的能力优于Cytodex-3微载体；可有效维持软骨细胞的特有表型其效果与优于Cytodex-3。